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        生物知識

        MP的FastDNA? SPIN Kit for Soil中文說明書

        作者:admin 來源:本站 發(fā)布時間: 2015-05-29 19:08  瀏覽次數(shù):
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        FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

         

        FastDNA SPIN Kit for Soil中文說明書

         簡介

               FastDNA® SPIN Kit for Soil的目的是從土壤樣品中提取基因組DNA 供PCR使用在不到30分鐘內(nèi)。快速DNA提取方法排除使用有害的有機溶劑,如苯酚和氯仿。該工具包可在土壤社區(qū)從所有的細菌,真菌,植物和動物的基因組DNA提取。

               試劑盒包括三個部分:

         

        1。裂解

         

        Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子,旨在有效地溶解所有不同來源的微生物,包括真細菌孢子和芽孢,革蘭氏陽性菌,酵母菌,藻類,線蟲和真菌。

        2。均質化試劑

         MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都經(jīng)過精心挑選和準備,使完整的樣本同質化和蛋白增溶。試劑能夠以最小的RNA污染提取基因組DNA。

         

        3。 DNA純化和洗脫試劑

          

        GENECLEAN ?過程是他們用來純化基因組DNA。程序純化DNA用專門的硅膠基質的同時消除污染物,抑制并發(fā)反應。

         

        * Binding Matrix懸浮

         

              * SEWS-M(鹽乙醇洗,用前加100ml乙醇)

         

        * DES(DNA洗脫液超純水)

         

         

        試驗方案

         

        樣品處理:

         

         

         

          

        1。添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。

         

        由于FastPrep ?儀器的移動,在管內(nèi)看到大量的聚集。相同Lysing Matrix不應超過管的體積的7 / 8。留在管的空間,也提高了更好的同質化的機會。 [見注1] 裂解:

         

        加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。 [見注1]

         

        2。 在FastPrep ?儀器中混勻40秒的速度6.0。

         

        3。14000 XG離心Lysing Matrix E Tubes 5-10分鐘。[見注2]

        4。上清轉移到一個2ml干凈的管。加入250μlPPS試劑和混合,用手搖動管的10次。

        5。 14000 XG離心5分鐘沉淀沉淀。上清轉移到一個干凈的15毫升管。 上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。 (Binding Matrix在用前重懸均勻) 

         

         

        6。放在一個旋轉器或手工反轉2分鐘,讓DNA結合基質。將管放架上靜置3分鐘,讓硅膠基質沉淀。

         

        7。小心去除500μL上清,避免碰到沉淀的Binding Matrix。棄上清。重懸Binding

         

        TMMatrix在剩余的液體中。約600μl的混合物轉移到SPIN Filter,14000 XG離

         

        心1分鐘。倒空Catch Tube,并把剩下的上清加到SPINTM Filter中離心過濾。

         

        8。添加500μL SEWS-M 到SPINTM Filter,離心1分鐘,在14000 XG。倒出流過液并把SPINTM Filter放回Catch Tube。14000 XG離心2分鐘,在清干SPINTM Filter中的剩余SEWS-M

        9。移動SPINTM Filter到新的Catch Tube,室溫下風干5分鐘。

        10。加入50-100μL DES輕輕的重懸,輕輕攪動濾膜用槍頭或渦流/手指輕彈,

         

         

          

        重懸為高效的DNA洗脫二氧化硅矩陣。在14000 XG離心1分鐘,轉移洗脫的DNA到Catch Tube。 DNA是目前應用就緒。

          

         

        注釋

         

        請閱讀在進行任何FastPrep® DNA提取 之前 1。注1

         

        重要:留下約0.25cc的空氣空間。如果留下太少的空氣空間,可能導致樣品的損失,由于管故障或變形。樣品的損失是由溫升FastPrep ?運行期間使壓力增加。在管內(nèi)預留0.25cc空氣空間,足夠防止在例行FastPrep ?運行中樣品損失。 2。注2

        擴展到15分鐘的旋轉,可增強消除過多的碎片從大量的樣品或從復雜的細胞壁的細胞。

        注意:請確認管重量平衡和管的側面和底部不會刮檫到你的離心壁,因為這將導致樣品的快速流失的重量和平衡。

         

         

         

         

        FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

         

         

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