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趙裕棟，周俊，何璟 * 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢430070 摘要:【目的】土壤中未培養(yǎng)微生物約占總量的99%，這就意味著絕大多數(shù)微生物資源還未得到開(kāi)發(fā)和利用。本研究通過(guò)優(yōu)化土壤微生物總DNA的提取方法，獲得較高質(zhì)量的DNA，為后期研究土壤微生物的多樣性及構(gòu)建大插入片段的宏基因組文庫(kù)奠定基礎(chǔ)。【方法】通過(guò)綜合比較已報(bào)道的微生物DNA提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)，我們?cè)O(shè)計(jì)出一種新的提取方案。對(duì)提取過(guò)程中的幾個(gè)關(guān)鍵步驟進(jìn)行了優(yōu)化，包括聯(lián)合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起來(lái)破細(xì)胞，利用氯仿除蛋白，使用PVPP柱純化DNA等。比較分析了優(yōu)化后的方法和3種已報(bào)道方法所獲得的土壤總DNA的產(chǎn)量、純度及片段大小。【結(jié)果】?jī)?yōu)化后的方法所獲得的土壤DNA質(zhì)量明顯有所提高:每克土壤最高能提取95 gDNA，A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平，PCR擴(kuò)增能夠得到明顯的目標(biāo)條帶，DNA片段最大能達(dá)到100kb左右。【結(jié)論】通過(guò)比較分析，最終確立了一種較理想的土壤微生物總DNA提取方法，為更好地開(kāi)發(fā)利用土壤未培養(yǎng)微生物資源提供了有力工具。
關(guān)鍵詞:土壤微生物，eDNA抽提，DNA的產(chǎn)量及質(zhì)量，PCR擴(kuò)增，大片段DNA 中圖分類號(hào):Q93-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0001-6209(2012)09-1143-08
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基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(30800020，30970059) ;教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(［2009］1590) ;教育部新世紀(jì)人才支持計(jì)劃項(xiàng)目(NCET-08-0779) ;中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(2009PY006) * 通信作者。Tel: +86-27-87280163;E-mail:hejingjj@mail． hzau． edu． cn 作者簡(jiǎn)介:趙裕棟(1986－) ，男，江西省九江人，2009級(jí)碩士研究生，研究方向?yàn)橥寥牢⑸锖昊蚪M學(xué)。E-mail:zyd3894816@yahoo． cn 收稿日期:2012-03-31;修回日期:2012-05-11
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