lonza 特殊 無血清 培養基

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作者：梅 玲

　　【關鍵詞】 ELISA

　　　　HIV抗體檢測是用于艾滋病防治的一項重要保證措施。因此,提高實驗室檢測的準確性,減少假陽性和假陰性反應的發生,對監測、診斷、血液篩查艾滋病來說是很重要的。為了更準確、更嚴謹地出示檢測報告，本HIV初篩實驗室在參加省級機構室間質評的同時，還進行室內質量控制。現將本室進行HIV室內質量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來源

　　　　1.1 外部對照質控血清

　　　　嚴格按照《全國艾滋病檢測技術規范》2004年版【1】制備弱陽性對照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級HIV實驗室指定使用經臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。由上海實業科華生物技術有限公司提供，所用試劑盒及內部對照質控血清均在有效期內使用。

　　　　2 實驗室設備校準

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動酶標洗板機

　　　　本室根據計量認證質量手冊的要求，嚴格按照作業指導書操作規程進行自校準，并詳細填寫原始記錄，有自校準報告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調節并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標儀（Reader2010）

　　　　均經省技術監督檢測中心檢定合格，并在檢定周期一年內使用，本室嚴格按照質量手冊中作業指導書的操作規程對微量加樣器定期進行期間核查，對酶標儀檢測數據進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴格按照計量認證質量手冊中作業指導書的操作規程進行操作。加入樣品量要準確，不得混入血細胞，同時每板設陰、陽性對照各2孔，空白對照1孔，質控弱陽性對照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴格掌握溫育時間，以免影響結果的精密度和準確性）；置自動洗板機上洗滌，洗板時應保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數（洗板次數少出現假陽性，洗板次數多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內置于酶標儀讀數，雙波長450/630nm測OD值。試劑固定同一廠家，購入試劑同時索要廠家的中國藥品生物制品檢定所批檢合格復印件，以保證所用試劑質量，不同批號試劑不得混用。嚴格按照本中心計量認證手冊規定的標準操作規程進行操作。

　　(2)在常規條件下，對同一批外部對照質控血清連續測定20次，獲得一組S/CO值，求均數()和標準差(s), 超出2s或3s的數據不應刪除。將均值()和標準差(s)分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱坐標(Y軸)，每一次試驗作橫坐標(x軸)，繪制質控圖。從第21次起，將每次質控血清的檢測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入質控狀態。每一次實驗必須使用外部對照質控血清，以便監控實驗的重復性和穩定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質量控制圖。質控圖是把檢測數據與已確定的 “控制限”進行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時間順序點入本實驗室每次實驗質控血清的測定值，觀察其是否在允許范圍內，月底計算當月全部質量控制血清檢測結果的S和CV，并進行圖形分析和小結，然后將質控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內質控是實驗室內部對所有影響檢測質量的各個環節進行系統控制，目的是控制本實驗室常規工作的精密度，提高常規工作前后的一致性。在ELISA法檢測HIV試驗中，當質控血清的S/CO值波動在 +2S范圍內，表明工作正常，結果可靠，若超過 +2S范圍時，系統處于告警狀態，應予注意，及時分析原始數據，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復測試，若超過 +3S范圍時，系統處于失控狀態，本次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內質控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標準血清、儀器設備未經檢定、校準或測試、溫育時間和溫度不準確、新的檢驗人員、質控標準血清反復凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計算當月測定結果的S和CV，并與其他月份同一批號質控標準血清所得S和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發現常規檢測的精密性和準確性是否發生了變化。

　　　　(4)所用的質控弱陽性對照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達到室溫方可使用。室內質量控制是通過對質控弱陽性對照血清的檢測和分析，推斷和控制常規標本的檢測質量，因此，質控弱陽性對照血清與檢測標本必須同等對待。每天檢測結束后，檢測者應把當天質控弱陽性對照血清測定結果畫在圖上，確定在允許范圍內，方可發出標本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質量控制圖中出現的各種問題，采取相應措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結果灰區。對于檢測過程中出現的灰區標本均應進行重復測試，以減少假陽性和假陰性結果的出現，并對實驗結果和過程進行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實驗室的質量保證，單純靠室內質控是不行的，還要建立健全實驗室的各項規章制度，掌握質量控制知識，做好預防性質量控制，保證標準品的質量等全過程的質量控制，從而提高檢驗質量。

　　【參考文獻】

　　　　1 全國艾滋病檢測技術規范.中國疾病預防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區疾病預防控制中心

　　　　【中圖分類號】 R181.9

　　　　HIV抗體檢測是用于艾滋病防治的一項重要保證措施。因此,提高實驗室檢測的準確性,減少假陽性和假陰性反應的發生,對監測、診斷、血液篩查艾滋病來說是很重要的。為了更準確、更嚴謹地出示檢測報告，本HIV初篩實驗室在參加省級機構室間質評的同時，還進行室內質量控制。現將本室進行HIV室內質量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來源

　　　　1.1 外部對照質控血清

　　　　嚴格按照《全國艾滋病檢測技術規范》2004年版【1】制備弱陽性對照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級HIV實驗室指定使用經臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。由上海實業科華生物技術有限公司提供，所用試劑盒及內部對照質控血清均在有效期內使用。

　　　　2 實驗室設備校準

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動酶標洗板機

　　　　本室根據計量認證質量手冊的要求，嚴格按照作業指導書操作規程進行自校準，并詳細填寫原始記錄，有自校準報告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調節并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標儀（Reader2010）

　　　　均經省技術監督檢測中心檢定合格，并在檢定周期一年內使用，本室嚴格按照質量手冊中作業指導書的操作規程對微量加樣器定期進行期間核查，對酶標儀檢測數據進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴格按照計量認證質量手冊中作業指導書的操作規程進行操作。加入樣品量要準確，不得混入血細胞，同時每板設陰、陽性對照各2孔，空白對照1孔，質控弱陽性對照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴格掌握溫育時間，以免影響結果的精密度和準確性）；置自動洗板機上洗滌，洗板時應保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數（洗板次數少出現假陽性，洗板次數多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內置于酶標儀讀數，雙波長450/630nm測OD值。試劑固定同一廠家，購入試劑同時索要廠家的中國藥品生物制品檢定所批檢合格復印件，以保證所用試劑質量，不同批號試劑不得混用。嚴格按照本中心計量認證手冊規定的標準操作規程進行操作。

　　(2)在常規條件下，對同一批外部對照質控血清連續測定20次，獲得一組S/CO值，求均數()和標準差(s), 超出2s或3s的數據不應刪除。將均值()和標準差(s)分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱坐標(Y軸)，每一次試驗作橫坐標(x軸)，繪制質控圖。從第21次起，將每次質控血清的檢測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入質控狀態。每一次實驗必須使用外部對照質控血清，以便監控實驗的重復性和穩定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質量控制圖。質控圖是把檢測數據與已確定的 “控制限”進行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時間順序點入本實驗室每次實驗質控血清的測定值，觀察其是否在允許范圍內，月底計算當月全部質量控制血清檢測結果的S和CV，并進行圖形分析和小結，然后將質控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內質控是實驗室內部對所有影響檢測質量的各個環節進行系統控制，目的是控制本實驗室常規工作的精密度，提高常規工作前后的一致性。在ELISA法檢測HIV試驗中，當質控血清的S/CO值波動在 +2S范圍內，表明工作正常，結果可靠，若超過 +2S范圍時，系統處于告警狀態，應予注意，及時分析原始數據，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復測試，若超過 +3S范圍時，系統處于失控狀態，本次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內質控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標準血清、儀器設備未經檢定、校準或測試、溫育時間和溫度不準確、新的檢驗人員、質控標準血清反復凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計算當月測定結果的S和CV，并與其他月份同一批號質控標準血清所得S和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發現常規檢測的精密性和準確性是否發生了變化。

　　　　(4)所用的質控弱陽性對照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達到室溫方可使用。室內質量控制是通過對質控弱陽性對照血清的檢測和分析，推斷和控制常規標本的檢測質量，因此，質控弱陽性對照血清與檢測標本必須同等對待。每天檢測結束后，檢測者應把當天質控弱陽性對照血清測定結果畫在圖上，確定在允許范圍內，方可發出標本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質量控制圖中出現的各種問題，采取相應措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結果灰區。對于檢測過程中出現的灰區標本均應進行重復測試，以減少假陽性和假陰性結果的出現，并對實驗結果和過程進行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實驗室的質量保證，單純靠室內質控是不行的，還要建立健全實驗室的各項規章制度，掌握質量控制知識，做好預防性質量控制，保證標準品的質量等全過程的質量控制，從而提高檢驗質量。

　　【參考文獻】

　　　　1 全國艾滋病檢測技術規范.中國疾病預防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區疾病預防控制中心