一、概述
霍亂是由霍亂弧菌引起的一種急性腸道傳染病，以發病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是《國際衛生條例》規定的國際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國傳染病防治法》規定的甲類傳染病之一。《國內交通衛生檢疫條例》也將其列為檢疫傳染病。
我國從1961年第七次霍亂世界大流行開始便受到波及，除西藏無病例報告外，其余各省（市、區）均有疫情發生。1993年開始，我國部分地區也相繼發生O139霍亂的局部暴發與流行。隨后出現了多菌群（型）混合流行的局面。
霍亂弧菌經水和食物傳播，流行規律目前尚不十分明確，引起霍亂流行的自然因素和社會因素依然存在。沿海水域、河口和內陸河流、湖泊等自然水體是霍亂弧菌的自然生境，在自然水體中霍亂弧菌依附浮游生物生存，監測研究發現霍亂的暴發流行與氣候和水溫、浮游生物的繁殖有高度的關聯。在我國這些水域同時也分布著海水、淡水產品（本方案統稱為水產品）養殖基地。霍亂病人糞便常污染人群生活鄰近水體。這些水體中以及水產品攜帶的產毒霍亂弧菌在人群霍亂的發生和傳播中發揮作用。為進一步加強我國霍亂監測工作，及時發現新病例、識別暴發、確定傳染源，同時進一步了解霍亂弧菌在外環境中的生存變化以及環境水體和食品污染與流行的關系，掌握霍亂的流行規律，為制定防治策略和措施提供科學依據，特制訂本方案。
二、監測目的
1、及時發現霍亂病例，掌握疫情動態，早期識別暴發疫情，分析流行因素；
2、掌握我國霍亂菌株的型別、分布、毒力、耐藥性變化情況，監測菌型變遷與流行的關聯性；
3、了解霍亂弧菌在我國水體中存在和動態變化情況、以及與沿海和內陸霍亂流行的關系。
三、監測定義
1、腹瀉病例：
指每日排便三次或以上,且具有大便性狀異常的病例。
2、疑似病例
具有下列三項之一者：
（1）凡有典型臨床癥狀，如劇烈腹瀉，水樣便(黃水樣、清水樣、米泔樣或血水樣)，伴有嘔吐，迅速出現脫水或嚴重脫水，循環衰竭及肌肉痙攣(特別是腓腸肌)的病例。
（2）霍亂流行期間，與霍亂病人或帶菌者有密切接觸史，并發生瀉吐癥狀者。
（3）出現無痛性腹瀉或伴有嘔吐，且糞便或嘔吐物霍亂弧菌快速輔助診斷檢測試驗陽性的病例。
3、臨床診斷病例
具有下列三項之一者均可視為臨床診斷病例：
（1）疑似病例的日常生活用品或家居環境中檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌者；
（2）疑似病例的糞便、嘔吐物或肛拭子標本霍亂弧菌毒素基因PCR檢測陽性者；
（3）在一起確認的霍亂暴發疫情中，具有直接暴露史且在同一潛伏期內出現無痛性腹瀉或伴嘔吐癥狀者。
4、實驗室確診病例
（1）凡有腹瀉癥狀，糞便、嘔吐物或肛拭子樣品培養O1群或/和O139群霍亂弧菌陽性者。
（2）在疫源檢索中，糞便或肛拭子樣品檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌前后各6天內有腹瀉癥狀者。
5、帶菌者
指無腹瀉或嘔吐等臨床癥狀，但糞便中檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌。
6、臨床分型
（1）輕型：僅有腹瀉癥狀，極少伴嘔吐，大便一天少于10次，大便性狀為軟便、稀便或黃水樣便，個別患者糞便帶粘液或血，皮膚彈性正常或略差，大多數患者能照常進食及起床活動，脈搏、血壓、尿量均正常。
（2）中型：腹瀉次數一日10～20次，精神表現淡漠，有音啞，皮膚干而缺乏彈性，眼窩下陷，有肌肉痙攣，脈搏細速，血壓（收縮壓）兒童＜9.33kPa（70mmHg），成人12～9.33kPa（90～70mmHg），尿量每日＜400mL，脫水程度相當體重兒童為5％～10％，成人為4％～8％。
（3）重型：腹瀉次數一日20次以上，極度煩躁甚至昏迷，皮膚彈性消失，眼窩深凹，明顯發紺，嚴重肌肉痙攣，脈搏微弱而速，甚或無脈，血壓（收縮壓）兒童＜6.67kPa（50mmHg），成人＜9.33kPa（70mmHg）或測不到等循環衰竭的表現，尿量每日＜50mL或無尿，脫水程度兒童相當于體重10％以上，成人8％以上。
（4）中毒型(干性霍亂)：為一較罕見類型，起病后迅速進入休克狀態，無瀉吐或瀉吐較輕，無脫水或僅輕度脫水，但有嚴重中毒性循環衰竭。
四、全國常規監測
（一）疫情報告
按照《中華人民共和國傳染病防治法》和《突發公共衛生事件與傳染病疫情監測信息報告管理辦法》，各級各類醫療機構、疾病預防控制機構、衛生檢疫機構執行職務的醫務人員發現疑似、臨床診斷或霍亂確診病例后，城鎮于2小時內，農村于6小時內填寫報告卡進行網絡直報。不具備網絡直報條件的應在診斷后以最快的通訊方式報告疫情，并向相應單位送（寄）出“傳染病報告卡”，縣級疾病預防控制機構和具備條件的鄉鎮衛生院收到傳染病報告卡后立即進行網絡直報。確診病例必須由疾病預防控制中心進行確認和報告。
各疾病預防控制中心在接到轄區內霍亂病例報告后，立即對病例（和帶菌者）進行流行病學調查并填寫個案調查表（見附表1），通過傳染病疫情網絡直報系統“監測信息反饋”上傳至中國疾病預防控制中心。
在5-10月霍亂流行季節，各省級疾病預防控制中心每周三前將上周霍亂疫情監測情況（見附表2）通過傳染病疫情網絡直報系統“監測信息反饋”上傳至中國疾病預防控制中心（包括零報告）。
（二）腹瀉病人檢索
1、腸道門診的設立
霍亂多發地區的各級各類醫療機構，在霍亂流行季節須按照衛生部有關規定設立規范的感染科（腸道門診），包括診療室、觀察室、藥房以及專用廁所，指派專（兼）職醫、護、檢人員，配備專用醫療設備、搶救藥品、消毒藥械以及采集糞便標本的棉簽和放置標本的堿性蛋白胨增菌液，制定嚴格的工作制度及隔離消毒制度。并按要求做好腹瀉病人的就診專冊登記，逢瀉必登。農村基層醫療單位確因人員與房屋條件不能單獨設立時，也應在門診指定專人負責或專桌診治。
2、病原學檢測
各地必須做到逢疑必檢，即對每一霍亂疑似病例必須采集糞便或/和嘔吐物等標本進行病原菌分離培養。在霍亂多發地區，以縣為單位每年對腹瀉病人的病原菌分離檢索率不低于腹瀉病人總數的10%。
3、工作職責
樣品采集：各級醫療機構醫務人員負責采集病人、疑似病人的糞便和/或嘔吐物，保存于堿性蛋白胨水中，并及時送抵相應的實驗室檢驗。
樣品的檢驗：具備條件的實驗室按《霍亂防治手冊》（第五版）開展病原菌分離培養及菌株的血清分型。其他病原學分析檢測工作由地市級以上疾病預防控制中心負責。
菌株的上送：霍亂弧菌菌株管理必須依據《中華人民共和國傳染病防治法》及《中國醫學微生物菌種保藏管理辦法》的規定與要求進行保存、運送與管理。各實驗室必須設立霍亂菌株記錄數據庫，填寫霍亂菌株登記表（見附表4），記錄菌株的來源與去向（包括上送及銷毀等）。各醫院臨床實驗室分離的霍亂菌株必須立即送當地疾病預防控制中心進行復核鑒定。各縣（區、市）的首發病例菌株必須立即上送省疾病預防控制中心進行復核，其余菌株在一周內逐級上送至省級疾病預防控制中心鑒定與保存。各級醫療單位、研究所及省級以下疾病預防控制中心未經衛生部批準均不得保存。所有菌株在上送的同時，須按要求（見附表4）提供菌株來源信息。
（三）暴發疫情監測
按照《中華人民共和國傳染病防治法》，各級各類醫療機構、疾病預防控制機構、衛生檢驗機構執行職務的醫務人員發現霍亂暴發、流行疫情時，按照《國家突發公共衛生事件應急預案》規定級別的要求進行報告。
在暴發疫情調查處理過程中要加強主動搜索，及時發現帶菌者，對所有病例和帶菌者進行個案調查，并填寫個案調查表（見附表1），將個案調查表錄入數據庫，在上報疫情總結報告時，一并上報數據庫。
暴發疫情處理結束后，要及時收集、整理、統計、分析調查資料，寫出詳細的報告，報告主要內容包括：疫情概況、首發病例或指示病例的描述、流行基本特征、暴發原因、實驗室檢測結果和病原分型、控制措施和效果評估等。在疫情控制工作結束后7天內完成結案報告。
（四）外環境及食品監測
1、外環境監測
在霍亂多發地區，根據當地霍亂疫情形勢，開展環境水體監測。環境水體包括淡水和海水養殖場、亞熱帶地區沿海水域、水產品碼頭、醫院污水排放口、下水道排放口、肉聯加工的出廠水、與人群生活關系密切的河流、池塘、湖泊、水井以及鄉鎮自來水廠源水等。
2、食品監測
在霍亂多發地區，開展水產品以及其它食品的監測。監測的重點包括市售水產品以及生冷、鹵制食品。
在流行季節，各地按月定期開展外環境和食品的監測工作。各省可根據本省情況確定監測工作量。外環境及食品監測的細菌分離培養由各轄區疾病預防控制中心實驗室完成，分離菌株應及時上送省疾病預防控制中心；省疾病預防控制中心應對上送菌株進行進一步的分析。
環境和食品監測陽性標本填寫“霍亂弧菌環境和食品監測陽性標本登記表”（見附表5）。各疾病預防控制中心每月將監測結果整理錄入霍亂弧菌環境和食品監測統計匯總表（見附表6）按月上報。
（五）病原學監測
1、菌株的常規鑒定
對獲得的所有霍亂弧菌菌株均必須由各級疾病預防控制中心進行O1或O139群血清學分群（型）；以縣（區、市）為單位的首發病例的菌株必須進行系統的生化鑒定、試管凝集試驗、生物學分型、噬菌體－生物分型、藥敏試驗等項目；其余菌株的鑒定項目由各省疾病預防控制中心按實際情況確定。
2、霍亂毒素基因檢測
各省疾病預防控制中心負責全部菌株的毒素基因（CT）檢測（按《霍亂防治手冊》第五版第82頁的引物序列及PCR擴增方法），不具備檢測條件的省疾病預防控制中心可送國家疾病預防控制中心檢測。
3、菌株脈沖場凝膠電泳（PFGE）分析
PFGE的檢測工作由國家疾病預防控制中心或有條件的省疾病預防控制中心按PulseNet China要求的標準方法完成。省疾病預防控制中心負責選擇代表性菌株開展菌株的PFGE分析。
各省疾病預防控制中心實驗室對當年菌株的分離和分析情況，按“霍亂菌株實驗室檢測結果匯總表”（見附表7）的項目進行匯總，按年逐級上報。
4、耐藥性分析
各省由地市級或省疾病預防控制中心對分離菌株耐藥性進行分析，每季度選擇一定數量代表性菌株進行藥敏試驗。藥物種類必須至少包括：強力霉素(DOX)、諾氟沙星（NOR）、環丙沙星（CIP）、復方新諾明(SMZ)、丁胺卡那霉素(KAN)五種藥物。應用Kirby-Bauer紙片法進行檢測，依照《霍亂防治手冊》（第五版）關于菌株藥物敏感試驗方法操作。每次藥敏試驗必須用ATCC 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株的結果才可以報告。ATCC 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表8中。各省藥敏結果按季匯總，并將附表8、附表9按季度逐級上報。
5、菌株的管理
霍亂弧菌菌株管理必須依據《中華人民共和國傳染病防治法》、《中國醫學微生物菌種保藏管理辦法》及《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的規定與要求進行保存、運送與管理。各級醫療機構實驗室分離的霍亂菌株，應送交當地疾病預防控制機構進行復核。各疾病預防控制中心實驗室必須設立霍亂菌株登記本，記錄菌株的來源與去向（包括上送及銷毀等）。所有分離的霍亂弧菌菌株必須送省級疾病預防控制中心保存。
對以下菌株，各省疾控中心應把當年收集保存的上述菌株送國家疾控中心霍亂弧菌專業保藏中心：（1）以縣區為單位當年首發病例菌株；（2）每個暴發點的首例病例菌株、以及暴發事件中的代表性菌株和疫情相關的來自食品和水的菌株；（3）來自與疫情無關的外環境菌株；（4）首次檢出的新菌型；（5）死亡病例的菌株；（6）國家疾控中心其他要求上送的菌株。并按霍亂菌株登記表（附表4）的內容提供菌株來源信息。
五、監測點監測
（一）監測點選擇
根據霍亂流行的自然因素、既往環境檢測以及近年疫情流行情況，分別選擇海南、廣東、福建、浙江、上海、天津、廣西、遼寧、四川、北京、江西、山東、江蘇、河南、重慶、新疆和湖南等17個省份，每省以縣為單位，選擇2個監測點，共設置34個國家級監測點。要求監測點所在縣（區）疾病預防控制中心具有較好工作基礎，能完成監測任務。
（二）監測內容
1、監測點根據全國霍亂監測方案規定的監測工作開展常規的霍亂監測，包括腸道門診的設立、腹瀉病人的登記與檢索、病原學檢測、疫情報告、散發和暴發疫情調查等。在流行季節，監測點內各級各類醫療機構逐月統計匯總腹瀉病人登記檢索情況，按月上報至當地疾病預防控制中心。各級疾病預防控制中心每月10日前匯總后（見附表3）逐級上報至省疾病預防控制中心。
2、水系監測
（1）海水監測：在霍亂流行季節（5-10月），海南、廣東、福建、浙江、上海和天津監測點，分別在海岸水域、海水出海口以及海產品養殖區域各設立一個取水點，共三個取水點，每個取水點分成相隔數米的至少3個取水位置（上、中、下），每個取水位置采集2份水樣。每月共18份海水樣品，每月采樣一次。
（2）江河水監測
在霍亂流行季節（5-10月），廣西、遼寧、四川、重慶和江西內陸江河水系監測點，沿以往有霍亂疫情發生地段內的江河水域布置三個取水點。每個取水點分成相隔數米的至少3個取水位置（上、中、下），每個取水位置采集2份水樣。每月共18份江河水樣品，每月采樣一次。
（3）其他水體監測
各國家級監測點，在霍亂多發地區容易受到污染、或污染后容易造成人群感染的水體（如湖泊水產品養殖區、溝塘、水產碼頭、漁港、城市下水道排出口、自來水廠水源水及衛生河等）區域設立5個固定取水點，每點每次采集2份水樣，每月共10份水體樣品，每月采樣一次。
水體標本采樣時，現場收集每份水體樣品的pH、水溫、采樣點環境溫度三項基礎指標。pH測定用范圍在5.5-10.0的pH試紙，水溫和環境溫度可以普通酒精溫度計測定，并記錄在采樣送檢單（見附表10）。
3、海、水產品監測
在霍亂高發季節（5-10月），各國家級監測點對市售海、水產品、餐館內水產品以及養殖場中的水產品進行采樣監測，每月至少采集20份全標本（標本整體或整體的一部分）另采集60份涂抹標本（體表涂抹或鰓內涂抹等），并記錄在采樣送檢單（見附表11）。
（三）實驗室檢測
1、菌株分離
樣品采集與檢驗方法見“附件2. 水系霍亂弧菌監測點監測技術規范”。霍亂弧菌分離培養由監測點疾病預防控制中心實驗室完成，分離的霍亂弧菌菌株（包括非O1/非O139群霍亂弧菌）應及時報告和上送省疾病預防控制中心。
2、菌株分析
各省疾病預防控制中心應對上送菌株進行鑒定，包括以下指標：? 菌株血清群和型別；‚是否為產毒菌株；ƒ O1群El Tor型菌株時進行噬菌體-生物分型鑒定；„ 菌株的PFGE分析，沒有實驗條件的省份可將菌株送中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所。
3、檢測結果報告
各國家級監測點每月對分離結果、包括菌株檢測結果整理錄入“監測點水體霍亂弧菌分離記錄表（見附表10）”和“監測點海、水產品霍亂弧菌分離記錄表（見附表11）”，每月10日前將上月檢測結果，以電子文件形式逐級上報至中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所。
六、監測系統組成和職責
監測系統由衛生部、各級衛生行政部門、中國疾病預防控制中心及各級疾病預防控制中心、醫療機構組成。
（一）衛生部和各級衛生行政部門
衛生部領導全國霍亂監測工作，各級衛生行政部門負責組織開展本轄區內霍亂監測工作，并提供所需監測經費，保證監測工作的順利開展。
（二）中國疾病預防控制中心
1、組織全國監測方案的起草、論證、修改、調整和完善，為全國霍亂監測提供技術指導。
2、組織、確定全國監測點的布局，與國家級監測點所在省級疾病預防控制中心簽訂協議，明確具體任務和目標，為國家級監測點提供一定監測經費補助。
3、組織確定監測網絡的統一監測和檢測方法，組織對全國省級疾病預防控制中心和國家級監測點的專業技術人員的培訓。
4、設計監測數據的收集流程、方式，負責全國監測數據的收集、整理，定期對監測系統的全部數據進行分析、反饋。每年對全國霍亂監測系統進行年度工作總結。
5、組織專家定期對全國霍亂監測系統進行檢查、考核。
6、每年組織召開全國霍亂監測年度工作總結研討會。
（三）省級疾病預防控制中心
1、根據國家監測方案，結合本省實際情況制定本省監測實施方案；協助國家疾病預防控制中心確定本省國家級監測點，建立和完善本省的監測網絡。
2、負責本省監測專業技術人員培訓工作。
3、承擔本省國家級監測點的管理、業務指導，參與國家疾病預防控制中心對國家級監測點的監測工作檢查、考核。
4、與本省國家級及省級監測點疾病預防控制機構簽訂協議，明確具體任務和目標，按其完成情況確定監測經費補助數額。
5、完成國家監測方案中要求的菌株的收集與復核、病原學檢測等監測任務。
6、對全省監測資料進行收集、匯總和分析，按方案要求的時限上報中國疾病預防控制中心，并進行反饋。
7、對監測點的監測工作進行質量控制。
（四）市級疾病預防控制中心
根據國家監測方案的要求，協助省中心完成本地區監測點的監測任務和管理、業務指導；參與本地區監測點的監測工作。
（五）縣級疾病預防控制中心
按本監測方案要求，具體實施監測工作。完成疫情監測與報告、外環境監測、個案調查、病原學監測、暴發疫情調查與監測等任務的基礎資料收集工作，按規定的時限上報至省（市）疾病預防控制中心。負責病例標本的采集、檢測、上送。
（六）醫療機構
醫療機構處在發現霍亂病例的最前沿，負責完成門（就）診和住院病例的腹瀉病人的登記和標本采集，疫情報告和腹瀉病人檢索情況統計報告，協助疾病預防控制機構開展病例個案調查，配合疾病預防控制機構完成本方案所要求的其它監測工作等。
七、數據收集、分析、反饋
（一）數據收集
1.1霍亂個案調查表
1.2霍亂疫情周報表
2. 腸道門診病人登記表
3．腹瀉病人登記檢索月報表
4.霍亂菌株登記表
5．菌株實驗室檢測結果匯總表
6．霍亂弧菌環境和食品監測統計月報匯總表
7．霍亂弧菌環境和食品監測陽性標本登記表
8．霍亂菌株藥敏結果記錄表
9.霍亂菌株藥敏結果匯總報表
10．暴發疫情調查處理報告
（二）數據收集流程
監測點實施監測內容，各種數據收集、分析以及各種標本的采集
縣疾病預防控制中心→→→市疾病預防控制中心
↓↓
省級疾病預防控制中心
↓↓
中國疾病預防控制中心
（三）統計分析
1、腹瀉病人檢索率
2、每周、月、年發病數（例）、死亡數（例）、帶菌數、發病率（/10萬）、病死率（％）和死亡率（/10萬）。
3、病人年齡、性別、職業、時間分布。
4、病例臨床分型：輕、中、重型
5、水、食品監測樣品檢出率
6、分離菌株的型別、噬菌體-生物分型、菌株耐藥性、毒素基因檢測、脈沖場凝膠電泳分型等
7、暴發疫情的流行特征、分析
（四）數據的報告和反饋
監測工作月報于每月10日前、季報在下季度首月10日前，年報于下年度2月10日前上報至中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所。中國疾病預防控制中心每季度以簡報形式向各地反饋監測結果，并負責完成年度全國監測總結報告。
電子信箱地址：fuxiejiance@icdc.cn,
傳真：010-61739156
八、監測系統質量控制
（一）方案的起草和論證
衛生部組織全國相關專家起草監測方案，并廣泛論證。
（二）培訓
在監測工作開始前，由中國疾病預防控制中心組織統一培訓。
（三）監測工作的質量評價
質量控制用于分析和監督各級單位監測工作的質量，包括工作的及時性、準確性和覆蓋范圍。可以通過以下指標的分析進行質量控制：
人員培訓情況；
病例診斷及時性；
疑似診斷或確診后流行病學調查及時性；
漏報率；
腹瀉病例檢索率和分離率；
信息報告及時性；
實驗室分離菌株的時間和檢測菌株的比例；
菌株復核率；
技術資料檔案管理、原始記錄、總結等完整性。
九、附件
附表1 年霍亂個案調查表
附表2 年 月第 周霍亂疫情監測報表
附表3 年 月腹瀉病人登記檢索報表
附表4 年霍亂菌株登記表
附表5 年 月霍亂弧菌環境和食品監測陽性標本登記表
附表6 年 月霍亂弧菌環境和食品監測統計報匯總表
附表7 年霍亂菌株實驗室檢測結果匯總表
附表8 年 季度霍亂菌株藥敏結果記錄表
附表9 年 季度霍亂菌株藥敏結果匯總報表
附表10 年 月監測點水體監測霍亂弧菌分離記錄表
附表11 年 月監測點海、水產品霍亂弧菌分離記錄表
附件1 霍亂暴發疫情調查
附件2 水系霍亂弧菌監測點監測技術規范
附件1 霍亂暴發疫情調查
一、疫情發現和報告
各級疾病預防控制中心應密切注意本轄區的腹瀉疫情動態，在霍亂高發季節，尤其對具有霍亂類似癥狀并且短時間（五天）內在同一地區出現多個癥狀相似的病例報告，需要通過病例及其報告的分析，考慮和避免霍亂的漏診或誤診。
各級疾病預防控制中心接到霍亂暴發或疑似暴發疫情后，需詳細記錄報告者和報告單位的聯系方式、疫情發生地點和時間以及病例數等概況、病例特征、臨床和實驗室診斷、詢問對可能污染源的調查情況，并告知報告單位保留可疑食品、水及病人吐瀉物以便進一步檢查。立即向上級報告，迅速建立工作隊伍。可實施網絡直報的專業衛生機構的報告者對確證病例需立即進行網絡直報。
二、現場調查
霍亂暴發現場的處理要本著“時間早、范圍小、措施嚴、落到實處”的原則，調查與處理同步進行。現場調查工作主要包括：
1．核實診斷。到達現場后首先通過訪視病人、醫生和能提供病人患病信息的人，檢查實驗室檢測結果，對臨床標本或獲得的分離菌株應送平行的或上一級檢驗實驗室重復檢測，以進行診斷的核實。
2．散發或暴發流行的基本概況描述。統計病例在時間、地點和人群中的分布，劃定疫點、疫區，分析二、三代病例，從流行病學上分析傳播鏈。
3．個案調查。立即開展個案調查，按照“附表1. 霍亂個案調查表”以及“附表2.霍亂個案基本信息表”進行調查。附表2為在接收新病例后立即開展的調查并可于病人發病1-2天內獲得的結果，該表格需立即上報；附表1為病人已明確轉歸、對疫點處理完成后填寫的內容，可在病例救治和疫點處理完成后填寫并上報，該表格等同于《霍亂防治手冊》（第五版）中的個案調查表。個案調查應及時匯總分析。
4．散發、暴發流行因素的流行病學調查和分析。應通過個案調查信息和病例的三間（時間、地點、人群）描述，推斷首發病例、傳播鏈，提出感染來源的假設，設計病例對照研究等方法進行發生因素的分析，以追溯感染來源，調查受累人群。應對病人的行為因素、自然環境因素等廣泛收集資料，收集疫點（疫區）的基本資料，包括氣象、地理、水系、人口狀況、生活習慣、環境與飲食衛生、醫療服務設施和能力等，在個案調查表中應盡可能詳細調查感染者發病前五天內的飲食行為。
5．調查和確定密切接觸者。目的是發現新病例、疑似病例以及帶菌者，是主動檢測和監測，防止誤診和漏診，從流行病學上確定可能的播散范圍并按《霍亂防治手冊》（第五版）中的有關規定采取控制措施。對帶菌者的個案調查可使用附表1填寫相關項目。
6．樣品采集、實驗室檢測與實驗室監測。實驗室檢測應與流行病學調查密切結合，從最早懷疑或診斷霍亂病例開始即需要收集病人臨床標本，包括糞便、嘔吐物和血清。前兩者用于霍亂病原分離，后者收集臨床急性期和恢復期雙份血清、在始終沒有獲得病原時通過殺弧菌抗體的升高可輔助診斷。在工作能力可達到的范圍內，要對每個病例收集標本分離霍亂弧菌。對病人接觸的可疑食品及可疑水體，廣泛和規范地采集標本進行病原分離。因聚餐引起的暴發，除采集可疑食品標本外，對食品清洗水的來源也需采集標本做病原分離。獲得的病原體按本方案中的相關規定作病原特征檢測，匯總報告。外環境和食品中分離的病原，提供給相關實驗室作進一步分析，確定是否相似，以從病原學上獲得感染來源證據。在流行病學調查的始終、安排相應的標本采集和檢測，進行實驗室監測，與流行病學監測相結合分析感染來源和暴發流行的擴散。
7．疫點（疫區）處理。按照《霍亂防治手冊》（第五版）以及其他有關霍亂防治文件的規定進行疫情控制。
8．補充調查。隨調查的深入、假設的提出和驗證的需求、以及控制和預防工作的展開，根據需要及時開展補充調查，包括流行病學調查和實驗室檢測。
9．總結。對散發、暴發流行的處理，在控制工作完成后進行系統全面的工作總結，并將總結報告逐級報上一級疾病控制中心，直至國家疾病控制中心。總結報告中需包括依據具體數據（如采取控制措施前后的二代發病率、標本的病原分離率等，見《霍亂防治手冊》第五版中第二章第二節“三、防治措施的效果評價”）對控制工作的評價和下一步工作建議。
附件2 水系霍亂弧菌監測點監測技術規范
一、采樣與送檢技術規范
1．水體：水體的采樣一般要求用滅菌的500ml水樣瓶采集相對靜止的表層水（30cm以內）500ml，加蓋密封后在室溫（20-25℃）下送實驗室檢測。取水點的選擇應結合流行病學調查等資料確定，同時，采樣時應選擇在水流平穩或靜止處吸取。非疫情狀態下的監測采樣時間一般在清晨時，此時水體未受人群活動等因素影響。每個采樣點中采樣位置應相距數米、采集不少于2瓶做為平行檢測。
采樣時立即測定采集樣品的溫度、pH，并記錄當天的最高溫度和最低溫度，數據始終隨每份樣品的檢測報告逐級上報。
2．水產品：水生動物的采樣通常選取活的或新鮮的水生動物為采集對象，有時也應考慮冰凍的水生動物，以無菌操作采集合適的部位，如鰓部和/或腸內容物等，置采樣瓶（管）或食品采樣袋密封，在常溫下送檢。有條件的采樣點可將水生動物整體采回實驗室再進行相關處置。同時，要求以無菌棉簽涂抹五只（條）以上的某類水生動物體表、鰓及/或肛門，置堿性蛋白胨水送檢，每管堿性蛋白胨水作一份樣品看待。
3．樣品的送檢：統一要求在樣品采集后，按生物安全規范，在室溫條件下3小時內送抵實驗室開展霍亂弧菌的分離培養。在北方地區冬季采樣時，應注意樣品的保溫，防止結冰。
二、水體和水產品樣本霍亂弧菌分離培養技術規范
（一）培養基要求：以堿性蛋白胨水（pH 8.6）作為增菌液；強選擇性分離培養基使用慶大霉素培養基或TCBS培養基；弱選擇性培養基統一使用堿性瓊脂。應注意不同廠商以及不同批號培養基的質量，每批培養基在使用前必須進行質量檢測，無條件開展質量檢測的監測點應由省疾病預防控制中心協助解決。
（二）水體樣本的增菌：增菌培養方法規定采用以下兩種之一。
1．十倍濃縮堿胨水增菌培養法：詳見《霍亂防治手冊》（第五版）第75頁。
2．濾膜富集增菌培養法：以0.45微米濾膜，使用Millipore真空過濾系統進行細菌富集，富集后的濾膜置含有終濃度為1/20萬亞碲酸鉀的10ml堿性蛋白胨水三角瓶內增菌。
3．水產品樣本增菌：使用無菌棉簽涂抹的樣品，直接接種到堿性蛋白胨水作為增菌液處理。整體或局部采回的樣品，在實驗室應先在無菌操作的條件下，將其解剖，取鰓部和腸內容物剪碎后，置100ml三角瓶內，加入5-10倍體積的堿性蛋白胨水增菌；但小貝殼類動物，則用錘子將外殼擊碎，整體放入三角瓶中增菌；甲殼類動物除含肉質部分外，其余部分（包括鰓、腸、足、表層外殼等）整體放入三角瓶進行增菌處理。
4．環境樣品的霍亂弧菌分離培養程序：樣品在37℃經8-12h增菌后，每份樣品分別接種一個9cm直徑的慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂平板和一個堿性瓊脂平板進行劃線分離培養，同時，以無菌吸管吸取0.2-0.5ml增菌液接種到新的堿性蛋白胨水中，進行二次增菌培養后，再如上述步驟進行劃線分離培養。特別強調所有環境樣品的增菌分離培養步驟必須包括上述二次增菌和強、弱雙平板分離。
5．疑似菌落鑒定基本要求：分別從慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂、堿性瓊脂平板上各挑取5個以上的（少于5個的全部挑取）疑似菌落接種于營養瓊脂斜面置37℃18-24h純培養（即每份樣品至少從4個分離平板上獲得約20株可疑菌落菌株），取斜面純培養物進行O1群及O139群霍亂診斷血清玻片凝集試驗，血清凝集陽性的菌株繼續相關的系統鑒定并報告結果。必須注意同一樣品中O1、O139群霍亂弧菌可能同時存在，有必要對所有選出的菌株都進行凝集試驗，以免遺漏。從環境中檢出的O1或O139群霍亂弧菌，要求即時上送省疾病預防控制中心進行噬菌體-生物分型，具備條件的進行毒素基因的PCR檢測、確定是否采取相關措施。
在有條件的單位，對血清凝集試驗陰性的菌株，可進行氧化酶和粘絲試驗初篩非O1/非O139群霍亂弧菌，并保留菌株按監測方案的要求逐級上送至省疾病預防控制中心。
下載全部附表
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