LONZA 龍沙  細胞培養基

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2, X-VIVO 限定化學成分無血清造血細胞培養基

3, ProCHO4 無蛋白CHO培養基

4, UltraDOMA無血清雜交瘤細胞培養基

5, UltraCHO無血清CHO細胞培養基

6, UltraCULTURE 無血清培養基

7, UltraDOMA-PF無蛋白雜交瘤細胞培養基

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LONZA 龍沙 細胞 培養基

 

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目的  從LCM獲取的上皮細胞中發現大腸癌各病變階段的miRNA特異性表達。驗證大腸癌和癌前病變中的候選miRNA腫瘤標記物。
方法  運用優化的LCM組織處理方法從225例正常腸上皮、癌前病變和浸潤癌手術切除冰凍組織中獲取純凈的上皮細胞。用Agilent芯片技術對上述標本進行全基因組miRNA表達分析。未配對t檢驗和方差分析對miRNA芯片數據進行顯著性差異分析。聚類分析進行miRNA基因表達差異的分類。用三種不同統計方法進行預測性分析。運用熒光實時定量RT-PCR進一步驗證14個候選的miRNA腫瘤標記物在185例手術切除和腸鏡活檢石蠟標本中的表達。未配對t檢驗對miRNA在大腸癌和癌前病變中的表達進行顯著性差異分析。受試者工作特征曲線(ROC)來評估候選miRNA腫瘤標記物的診斷價值。多元相關分析評估多個候選miRNA腫瘤標記物協同的診斷價值。
結果  在大腸粘膜上皮轉化和演進過程中，存在兩個水平分類組的miRNA：第一水平分類組可以預測非腫瘤和腫瘤；第二水平分類組可以預測腺瘤和腺癌。進一步驗證發現，其中7個miRNA能在手術切除的石蠟組織中區分腺瘤與腺癌及高級別上皮內瘤變與早期腸癌。miRNA-92a與miRNA-375組合鑒別高級別上皮內瘤變和早期腸癌的敏感性為95%，特異性為88%。除此之外, 這7個miRNA還能在腸鏡活檢組織中鑒別高級別上皮內瘤變和大腸浸潤癌，結果與術后病理診斷一致。其中miR-92a具有最高敏感性達93%；miR-7具有最高特異性達94%。
結論  miRNA表達與大腸癌腫瘤病理分期有顯著的相關性。miRNA可以準確預測腫瘤與非腫瘤及進一步區分腺瘤與腺癌組織。7個miRNA腫瘤標記物能鑒別腺瘤和腺癌及高級別上皮內瘤變和早期大腸浸潤癌（Dukes’ A）；還能在腸鏡活檢組織中鑒別高級別上皮內瘤變和大腸浸潤癌并與術后病理診斷一致。

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