問題：如果試劑的體積很小，我該怎么辦？
回答：如果試劑的體積很小，請在使用前將試劑瓶離心，以確保試劑集中于瓶底。
問題：不按指定的方法保存試劑可以嗎？
回答：不推薦，否則試劑的質量無法保證。
問題：可以將不同批號或試劑盒內的同一試劑混用嗎？
回答：不可以。
問題：在包被板使用前必須洗嗎？
回答：不是必須，但推薦使用，因為如果省略此步驟精確度可能會降低。
問題：孵育時間延長或縮短可以嗎？
回答：孵育時間必須嚴格按照說明書操作，才能得到最佳的結果。
問題：實驗必須重復一次嗎？
回答：不必須，但對于每個樣本和標準品建議做復孔。
問題：背景色過高是什么原因？
回答：造成背景色過高主要有以下幾點原因：
1）不正確的洗滌
洗滌不充分或省略洗滌步驟中的任何一步均會導致背景色過高。
解決方法：檢查洗滌緩沖液的體積并確保完成所有的洗滌步驟；確保洗滌緩沖液的正確稀釋和正確使用。
2）底物污染
確保在使用前，底物不被金屬離子或氧化劑污染；
在實驗時留存一些額外的底物
底物本身不應該有顏色
3）稀釋液污染
我們的大多數稀釋液均含有蛋白，在首次開瓶時可能會造成污染。在從瓶中取液體時一定要用 “滅菌” 的槍頭
4) 底物曝光
底物曝光會使底物變成蘭色，因此在加入板內之前要保存在暗處(即試劑瓶內)
5) 偶合物的錯誤稀釋
偶合物濃度過高會造成高背景色，因此要嚴格按照產品說明書稀釋
6) 錯誤的孵育時間和溫度
必須嚴格按照產品說明書來確定孵育時間和溫度
7) 包被板保存不當
如果包被板只用了一部分，一定要正確保存剩余的板條。
問題：測試內CV(變異系數)過高是什么原因？
回答：造成測試內CV(變異系數)過高主要有以下幾點原因：
1)在洗滌或吸取移液時，刮擦到板孔內部引起包被的抗體脫落
注意在洗滌包被板或吸移標準品和樣品時不要刮擦到板孔內表面。
2)在剝除包被板覆蓋物時造成孔與孔間的交叉污染
在每次孵育完成時，一定要小心地剝除包被板覆蓋物，以免孔與孔間的交叉污染。
3)樣品不均一
確保所測試樣品是均一的，在加入包被板前要混勻
4)邊緣效應
在孵育時要封好包被板，并盡可能在100 rpm的振蕩器上孵育。
5)移液器沒有正確校準
6)在實驗時，要確保移液器經過正確校準
問題：標準曲線不對是什么原因？
回答：造成標準曲線不主要有以下幾點原因：
1)凍干標準品重懸不正確
確保凍干標準品重懸在正確的液體中，并以正確的體積重懸。重懸體積在說明書和試劑瓶的標簽上均有表明
2）重懸時間過短
確保足夠的時間，以完全溶解凍干標準品
3）濃縮貯存標準品的不正確稀釋
濃縮貯存標準品要嚴格按照產品說明書正確稀釋
4）貯存標準品/預稀釋液的不正確保存
在說明書已注明貯存標準品和預稀釋液的保存條件，一定要嚴格按照說明書操作。
5）標準品污染
使用無菌槍頭，保存方法正確可以防止標準品的污染。
6）標準品稀釋時沒有正確混勻
在系列稀釋標準品時，要保證每步稀釋時均正確混勻。
7）檢測波長不正確
要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
8）使用其它批號的標準品
只能使用同一試劑盒內的標準品，不可以使用其它批號/試劑盒中的標準品。
問題：不顯色是什么原因？
回答：造成不顯色主要有以下幾點原因：
1）測試前未將試劑恢復至室溫
在實驗開始前要將所有試劑恢復至室溫。
2）某些試劑的不正確保存
所有試劑的保存方法在說明書中均有詳述，要嚴格依其操作。
3）HRP偶合試劑的污染
在此試劑用前一定要確保無污染。
4）HRP偶合試劑的不正確稀釋
如果HRP偶合試劑濃縮液過度稀釋，則顯色變弱，要按說明書操作。
5）2組分TMB的不正確混合
按說明書所示比例混合TMB底物，并保證正確混勻
6）省略孵育步驟
說明書中任何一步孵育步驟均不可省略。
7）洗滌后或儲存時，板孔干燥
洗滌后，在吸水紙上拍打板條以去除多余的洗滌緩沖液，之后要立即進行后面的操作步驟或倒口在吸水紙上不超過15分鐘，以免板孔干燥。
8)在洗滌或吸取移液時，刮擦到板孔內部引起包被的抗體脫落
注意在洗滌包被板或吸移標準品和樣品時不要刮擦到板孔內表面。
9）樣品不適合此檢測
在說明書中會列出每種產品的適用標本范圍，超出范圍的標本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索(如調節稀釋度等)
問題：樣品或標準品 “溢值” 是什么原因？
回答：造成樣品或標準品 “溢值” 主要有以下幾點原因：
1)樣品/標準品不正確稀釋
要嚴格按照說明書來稀釋樣品和標準品。
2)偶合試劑不正確稀釋
要嚴格按照說明書來稀釋偶合試劑，濃度過高會造成OD的 “溢值” HRP偶合試劑的不正確稀釋
3)所用稀釋液不對
只能使用相應試劑盒內的稀釋液稀釋樣品和標準品。
4)檢測波長不正確
要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
5)TMB底物的顯色時間過長
請監控顯色時間。說明書中所示的顯色時間可能因為溫度和其它檢測條件的不同而稍有變化。
6)樣品不適合此檢測
在說明書中會列出每種產品的適用標本范圍，超出范圍的標本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索(如調節稀釋度等)
7)樣品/標準品污染
樣品或標準品的污染可能會導致檢測結果 “溢值”。
8)孵育時間/溫度不正確
要嚴格按照說明書來確定孵育時間和溫度。
9)在孵育時為蓋上酶聯板覆蓋物
在孵育時需蓋上酶聯板覆蓋物，以防止液體蒸發或孵育期間的污染。每個試劑盒內均有足夠數量的酶聯板覆蓋物。 |
