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         生物知識 
      
        
        
         
          
        細胞適應無血清培養基的方法
        
          
        作者：admin 來源：本站 
            發布時間： 2011-01-07 16:51　
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        1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中。
        

        
　　一些類型細胞可直接從包含血清的        培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞完全適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
        

        
2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的        培養基轉換到無血清培養基（SFM）中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
        

        
（1） 以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75％有血清        培養基：25％SFM 混合培養基中，傳代培養。
        

        
（2） 當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清        培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
        

        
（3） 以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清        培養基和75％ SFM中傳代培養。
        

        
（4） 當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM        培養基中傳代培養。
        

        
（5） 每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清        培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
        

        
　　建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合        培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。
        

        
　　在適應過程中，最好不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清        培養基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。
        

        
　　細胞培養適應替代血清：許多細胞利用連續適應方法能很好的適應，用包含FBS的的        培養基和包含有替代血清的培養基1∶1（v∶v）的混合培養基培養細胞。通過下列的混合培養基的方式，連續幾代減少當前培養基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3 次。
        

        
　　培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。
        

        

        

        
　　特別需要強調的是：配制無血清培養液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清        培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。
        

        
無血清        培養基的優點
        

        
1. 可避免血清批次間的質量變動，提高細胞培養和實驗結果的重復性。
        

        
2. 避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。
        

        
3. 避免血清組分對實驗研究的影響。
        

        
4. 有利于體外培養細胞的分化。
        

        
5. 可提高產品的表達水平并使細胞產品易于純化。
        

        

        
缺點：
        

        
1. 細胞在無血清        培養基中易受某些機械因素和化學因素的影響，培養基的保存和應用不如傳統的合成培養基方便。
        

        
2. 成本較高。
        

        
3. 針對性很強，一種無血清        培養基僅適合某一類細胞的培養。
        

        
無血清        培養基一些配方
        

        
1. 神經細胞，干細胞，PC12細胞
        

        
成份    終濃度
        

        
葡萄糖－－0.6％
        

        
谷氨酰胺－2mM
        

        
NaHCO3－－3mM
        

        
Hepes －－5mM
        

        
胰島素－－2.5μg/ml
        

        
轉鐵蛋白 －100ng/ml
        

        
孕 酮 －－20nM
        

        
丁二胺－－60μM
        

        
硒酸鈉－－30nM
        

        
青霉素－－50mg/ml
        

        
鏈霉素－－50mg/ml
        

        
最后用DF12添加到100ml即可
        

        
2. 各類小鼠胚胎癌細胞系        培養基
        

        
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
        

        
NaHCO3 2.4g
        

        
HEPES「1.5M」 10.0ul
        

        
硒酸（5*10-6M」 10.0ug
        

        
纖粘連蛋白 1ug/cm2「37度作用15－30分鐘）
        

        
胰島素 1000.0ug
        

        
轉鐵蛋白 5000.0ug
        

        
3. NIH3T3小鼠成纖維細胞        培養基
        

        
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
        

        
HEPES 15mM
        

        
大豆胰酶抑制劑 0.1％
        

        
胰島素 10.0ug/ml
        

        
轉鐵蛋白 25.0ug/ml
        

        
纖粘連蛋白 5.0ug/ml
        

        
4. 雜交瘤細胞        培養基
        

        
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
        

        
NaHCO3 1.2g/L
        

        
HEPES 15mM
        

        
胰島素 5.0ug/ml
        

        
氨基乙醇 20.0uM
        

        
硒酸 2.5mM
        

        
轉鐵蛋白 35.5ug/ml
        
 
        		
              
        
            
        
          
        
        
        
        
         
        
        
         
          
         
            
        
              
         
                
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