藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗實驗室的質(zhì)量控制。藥品微生物的檢驗結(jié)果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗中，為保證檢驗結(jié)果的可靠性，必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實驗室規(guī)范要求進行試驗。
藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設(shè)備、文件、實驗記錄、結(jié)果的判斷等。
人員
從事藥品微生物試驗工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。
實驗人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)他們可以承擔(dān)某一任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)和實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實驗室應(yīng)制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃。
檢驗人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。微生物實驗室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符。如：管理技能、實驗室安全、試驗安排、預(yù)算、實驗研究、實驗結(jié)果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術(shù)報告書寫等。
實驗室應(yīng)通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等方法客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進行再培訓(xùn)并重新評估。當(dāng)使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術(shù)時，有必要在檢測前確認(rèn)微生物檢測人員的操作技能。
所有人員的培訓(xùn)、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄歸檔。

培養(yǎng)基
培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。
1．培養(yǎng)基的制備
培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。
脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下儲存，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途。
為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。
配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。
脫水型培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時，加入后應(yīng)充分混勻。
應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。
培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進行全面的滅菌程序驗證。
應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH（冷卻至室溫25℃測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出PH 的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH 允許的變化范圍很寬，否則，PH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成汽泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
2.培養(yǎng)基的貯藏
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行保存，所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機械保護。
培養(yǎng)基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。
培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過一周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存，保存期需經(jīng)驗證確定。
固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45～50℃的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進入培養(yǎng)基中造成污染。
使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進行。
3.質(zhì)量控制試驗
實驗室應(yīng)對試驗用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測的需要。
實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。
所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH，適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。
除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。
培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗若不符合規(guī)定，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。
用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護。用于關(guān)鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
菌 種
試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。
藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。
標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)進行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲存，超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。
工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5 代（從菌種收藏機構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0 代），以防止過度的傳代增加表型變化的風(fēng)險。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時，實驗室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進行確認(rèn)。
工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。
實驗室必須建立和保存其所有菌種的進出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗以及銷毀的記錄，應(yīng)有文件化的程序管理菌種（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株），該程序包括：標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄；從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作及記錄；菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關(guān)鍵診斷指標(biāo)的確認(rèn)，并記錄；每支菌種都應(yīng)適當(dāng)標(biāo)注，注明其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、所傳代數(shù)；菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保存的位置和條件；其它需要的程序。
實驗室的布局和運行
實驗室應(yīng)具有進行微生物檢測所需的適宜、充分的設(shè)施條件。實驗室的布局與設(shè)計應(yīng)充分考慮到良好微生物實驗室操作規(guī)范和實驗室安全的要求。實驗室布局設(shè)計的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害。合適的規(guī)劃及活動區(qū)域的合理區(qū)分將提高微生物實驗室操作的可靠性。
通常，實驗室應(yīng)劃分成潔凈或無菌區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)試驗?zāi)康模跁r間或空間上有效分隔不相容的試驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最低。
一般情況下，藥品微生物檢驗的實驗室應(yīng)有符合無菌檢查法（附錄ⅩⅢB）和微生物限度檢查法（附錄ⅩⅢC）要求的、用于具有開展無菌檢查、微生物限度檢查、無菌采樣等檢測活動的、獨立設(shè)置的潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng)，并為上述檢驗配備相應(yīng)的細(xì)菌（真菌）等實驗室、培養(yǎng)室、培養(yǎng)基及實驗用具準(zhǔn)備（包括滅菌）區(qū)、樣品接收和儲藏區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)菌株儲藏區(qū)、污染物處理區(qū)和文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域，同時，應(yīng)對上述區(qū)域明確標(biāo)識。
實驗室應(yīng)對進出潔凈區(qū)域的人和物建立控制程序和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（如更衣程序等），應(yīng)按相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)建立潔凈室（區(qū)）和隔離系統(tǒng)的驗證、使用和清潔維護標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對可能影響檢測結(jié)果的工作（如潔凈度驗證及監(jiān)測、消毒、清潔維護等）能夠有效地控制、監(jiān)測并記錄。
實驗室對所用的消毒劑種類應(yīng)定期更換，使用的消毒劑應(yīng)無菌。一些樣品需要證明微生物的生長，并需要在實驗室進一步分析污染物的特性，如再培養(yǎng)、染色、微生物鑒定或其它確定試驗均應(yīng)在實驗室的活菌操作區(qū)進行。任何出現(xiàn)微生物生長的培養(yǎng)物不得在實驗室無菌區(qū)域內(nèi)打開。對染菌樣品的有效隔離可以減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。
實驗人員不能在實驗室的活菌操作區(qū)域或鄰近區(qū)域進行抽樣。應(yīng)采用無菌操作技術(shù)進行取樣，防止在取樣過程中使樣品受到微生物的污染而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。因此，實驗設(shè)施應(yīng)設(shè)計成保證樣品在控制條件下抽樣，包括能有效防止微生物污染的無菌設(shè)施及環(huán)境、適宜的無菌服、無菌抽樣器具和合格的操作人員，并記錄抽樣環(huán)境的監(jiān)測結(jié)果。如果可能，所有的樣品應(yīng)在具有無菌條件的特定抽樣間進行無菌抽樣。
被檢樣品應(yīng)有傳遞、儲存、處置和識別管理程序。待驗樣品應(yīng)在合適的條件下儲存并能夠保證其完整性而不改變其性狀，應(yīng)明確規(guī)定和記錄儲存條件。
實驗室還應(yīng)針對類似于帶菌培養(yǎng)物溢出的意外事件制定處理規(guī)程。如：活的培養(yǎng)物灑出必須就地處理，不得使培養(yǎng)物污染擴散。
實驗室應(yīng)有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設(shè)施和制度。
設(shè) 備
實驗室應(yīng)配備與檢驗?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備，其類型、測量范圍和準(zhǔn)確度等級應(yīng)滿足檢驗所采用標(biāo)準(zhǔn)的要求，設(shè)備的安裝和布局應(yīng)便于操作，易于維護、清潔和校準(zhǔn)。
實驗室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，使用要有記錄。為保證設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應(yīng)定期維護和期間核查，并保存相關(guān)記錄。
微生物實驗室所用的儀器應(yīng)根據(jù)日常使用的情況進行定期的校準(zhǔn)，并記錄。校準(zhǔn)的周期和校驗的內(nèi)容將根據(jù)儀器的類型和設(shè)備在實驗室產(chǎn)生的數(shù)據(jù)的重要性的不同而不同。重要的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、冰箱等，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，保證其運行狀態(tài)正常和受控，同時應(yīng)有相應(yīng)的備用設(shè)備以保證試驗菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性；對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋等影響實驗準(zhǔn)確性的關(guān)鍵設(shè)備應(yīng)在其運行過程中對關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力）進行連續(xù)觀測和記錄，有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置。如果發(fā)生偏差，應(yīng)評估對以前的檢測結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。
對于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期進行清潔和消毒。
對試驗需用的無菌器具應(yīng)實施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識并與非無菌器具加以區(qū)別。
文件
文件應(yīng)當(dāng)充分表明試驗是在實驗室里按可控的檢查法進行的，一般包括以下方面：人員培訓(xùn)與資格確認(rèn)；設(shè)備驗收、檢定（或校準(zhǔn)期間核查）和維修；設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)和使用記錄（如24 小時或7 天記錄圖）；培養(yǎng)基制備、貯藏、和質(zhì)量控制；檢驗規(guī)程中的關(guān)鍵步驟；數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算的確認(rèn) ；質(zhì)量責(zé)任人對試驗報告的評估；數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查。
實驗記錄
實驗結(jié)果可靠性的依賴于試驗嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行，而標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)指出如何進行正確的試驗操作。實驗記錄應(yīng)包含所有關(guān)鍵的實驗細(xì)節(jié)，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。
實驗室原始記錄至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：實驗日期、檢品名稱、實驗人員姓名、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號或方法、實驗結(jié)果 、偏差（存在時）、實驗參數(shù)（所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基和批號以及培養(yǎng)溫度等）、主管/復(fù)核人簽名。
每一個關(guān)鍵的實驗設(shè)備均應(yīng)記錄在案，所有按要求進行的校準(zhǔn)過程及設(shè)備維護均需記錄。任何恰當(dāng)?shù)娜粘Ｓ涗浂际怯杏玫摹ＴO(shè)備溫度（水浴，培養(yǎng)箱，滅菌器）必須記錄和監(jiān)測。
實驗記錄寫錯時，用單線劃掉并簽字。原來的數(shù)據(jù)不能抹去或被覆蓋。
所有實驗室記錄應(yīng)以文件形式保存并防止意外遺失，正規(guī)的記錄應(yīng)存放在特定的地方并有登記。
結(jié)果的判斷
由于微生物試驗的特殊性，在實驗結(jié)果分析時，應(yīng)從各個可能的方面去考慮，不但要假設(shè)被污染，而且要考慮微生物在原料、輔料或試驗環(huán)境中存活的可能性。
此外，還應(yīng)考慮微生物生長特性。
對實驗結(jié)果應(yīng)進行充分和全面的評價。所有影響結(jié)果觀察的微生物條件和因素應(yīng)完全考慮，包括與規(guī)定的限度或標(biāo)準(zhǔn)有很大的偏差結(jié)果。關(guān)鍵是應(yīng)知道實驗結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的差別是否有統(tǒng)計學(xué)意義。
若發(fā)現(xiàn)實驗結(jié)果不符合藥典各論要求或另外建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)進行原因調(diào)查。引起微生物污染結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)的原因主要有兩個：試驗操作錯誤或產(chǎn)生無效結(jié)果的試驗環(huán)境條件；產(chǎn)品的微生物污染總數(shù)超過規(guī)定的限度或檢出控制菌。
異常結(jié)果分析時，應(yīng)充分考慮實驗室環(huán)境、抽樣區(qū)的防護條件、樣品在該檢驗條件下以往檢驗的情況，樣品本身具有使微生物存活或繁殖的特性等情況。此外，回顧試驗過程，也可評價該實驗結(jié)果的可靠性及實驗過程是否恰當(dāng)。如果試驗操作被確認(rèn)是引起實驗結(jié)果不符合的原因，那么應(yīng)制定改錯方案以解決問題，按照正確的操作方案進行實驗，在這種情況下，對試驗過程及試驗操作應(yīng)特別認(rèn)真地進行監(jiān)控。
如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗有錯誤而判實驗結(jié)果無效，那么這種情況必須記錄。實驗室也必須認(rèn)可復(fù)試程序，如果需要，可按相關(guān)規(guī)定重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規(guī)定結(jié)果的分析調(diào)查。