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| 病理技術(shù)的發(fā)展與現(xiàn)狀 病理學(xué)技術(shù)包括傳統(tǒng)病理技術(shù)和現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)。傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)（HE切片、特殊染色）是病理學(xué)的基礎(chǔ)，大量應(yīng)用于日常工作中，是提高診斷水平和現(xiàn)代病理技術(shù)的保證。 回顧過去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用的結(jié)果。同時新技術(shù)的應(yīng)用，也受到病理診斷水平和科研能力的制約。 病理學(xué)經(jīng)歷了組織病理、超微病理、免疫病理和分子病理階段。免疫病理在很大程度上解決了很多疾病的性質(zhì)和來源，而分子病理學(xué)進一步揭示了發(fā)病機制（特別是病毒學(xué)檢 查），預(yù)后以及外源性基因在人體內(nèi)的存在和內(nèi)源性基因的突變和表達異常，解決了一些用蛋白水平不能解決的問題。 目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免疫組化為主，整體水平不高，處于中等以下水平。我這樣說也許有很多技術(shù)員會有意見。請看一個數(shù)據(jù)：2004年，中國病理 學(xué)工作委員會在全國最具代表性的15家3級甲類大型醫(yī)院病理科，對5個抗體的免疫組化質(zhì)量進行測評，結(jié)果合格的只有3-4家，從一個側(cè)面反映了中國病理技術(shù)的現(xiàn)狀。而且這4家 合格單位的成績還存在很多的水分：第一，所有切片的前處理都是由北京友誼醫(yī)院統(tǒng)一完成的，消除了各家由于固定、脫水、切片、烤片等原因引起的抗原損失的因素；第二，很 多單位對這幾張片子都是精心加工的，并不代表平時的水平。也就是說加上這二條，成績還會更差。要做好一、二張切片并不難，難的是要天天做好片子。那么造成這樣的結(jié)果原 因是什么？我想用我自己的經(jīng)驗片面的分析一下： 一、技術(shù)員的定位 中華病理學(xué)會給技術(shù)的定位是在醫(yī)生指導(dǎo)下工作。這里容易給人造成二大誤區(qū)： 1、病理診斷與病理技術(shù)是二門完全不同的學(xué)科，對于病理技術(shù)而言，醫(yī)生是外行，技術(shù)員是內(nèi)行，讓外行來指導(dǎo)內(nèi)行，容易讓醫(yī)生錯誤的認為技術(shù)工作的簡單性。 2、容易讓技術(shù)員產(chǎn)生被動性和依賴性。 醫(yī)生說什么我做什么，喪失了主觀能動性創(chuàng)新性。出了問題需要醫(yī)生指出原因才去改。由于很多原因醫(yī)生并不可能真正知道，導(dǎo)致很 多問題不能得到正確解決。 所以，分工明確，各盡其職，充分發(fā)揮技術(shù)員的主觀能動性是提高技術(shù)水平的關(guān)鍵。醫(yī)生做好醫(yī)生自己的工作，技術(shù)員也應(yīng)該做好自己的工作。出現(xiàn)問題，做醫(yī)生的只要指出 自己需要什么，或者出了什么問題，至于問題的原因和解決的辦法，就應(yīng)該讓技術(shù)員自己的解決。只有這樣，才能培養(yǎng)技術(shù)員的獨立思考能力和解決問題的能力，才能提高技術(shù)員 的業(yè)務(wù)水平，才會讓技術(shù)員覺得知識的重要性以及享受到解決問題的喜悅，才會領(lǐng)悟到工作的意義。 二、技術(shù)員本身的原因： 1） 技術(shù)員隊伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷偏低。大多數(shù)病理科技術(shù)員都是中專畢業(yè)，也有的是工人轉(zhuǎn)的，有的是護士轉(zhuǎn)的。我也反對唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能代表一個人真正的能力 ，但在大多數(shù)情況下，學(xué)歷還是能力的體現(xiàn)。經(jīng)歷了大學(xué)或研究生的培養(yǎng)學(xué)習(xí)，他們的知識面和考慮問題的思路都是不一樣的。而低學(xué)歷的人要學(xué)超過他們，需付出更多的努力才 能達到。 2）在主觀上不求上進者甚多，我這樣說會引起技術(shù)員的公憤，但事實的確如此，看一下自己周圍：沒有理想，不思改進，做一天算一天，已是很多技術(shù)員的通病。這就和我們 的體制有關(guān)，只有通過崗位競聘，才會讓技術(shù)員認識到問題的嚴重性。能上網(wǎng)關(guān)心技術(shù)的，都是好學(xué)的朋友，對整個技術(shù)隊伍來說，還是極少數(shù)。 3）缺少正規(guī)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機會，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅帶徒弟式的方法教的，也有的自學(xué)了；有的盡管出去進修了，但學(xué)回來的并不一定是正確的，就是正確的，也要 和自己科里的實際情況相結(jié)合，作出相應(yīng)的調(diào)整，才能真正做好。還有就是缺少相互交流的機會，有關(guān)技術(shù)的會議較少，技術(shù)員出來開會的機會就更少。 4） 缺少橫向比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技術(shù)員的自我感覺都很好，認為自己做的很不錯，對“好”沒有概念，如果不知道別人做的怎么樣，那么 對切片質(zhì)量就沒有一個正確的認識。有的人出去學(xué)習(xí)，走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)的，別人做的和自己沒什么不一樣。諸不知每一個人的動作都有差異，正因為這些細微的差異， 導(dǎo)致了每個人切片質(zhì)量的不一樣。還有一些技術(shù)員，把一些不規(guī)范的甚至是錯誤的東西當成了經(jīng)驗來宣傳、使用和推廣。 5）不能正確擺正自己的位置。 程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)是二個輪子，缺一不可，互為依存。這話有一定的道理的，但我認為不夠確切，容易讓人主次不分，醫(yī)生與技術(shù)員的風(fēng)險與價值是不能等同 的。有的技術(shù)員什么事情都要和醫(yī)生比，當二者出現(xiàn)差異后，醫(yī)技關(guān)系就開始緊張，有的就和醫(yī)生頂著干，有的自暴自棄，有的甚至目空無人，孤芳自賞。我覺的任何事物都有主 次，紅花總要綠葉配，沒有綠葉的紅花會怎么樣？但不能說綠葉重要就可以做紅花。病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了 技術(shù)這個工作，就應(yīng)該有這樣的思想準備，應(yīng)該正確的面對現(xiàn)實。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會因為你的片子做得好沖著你來。我覺得病理科更像一輛列車， 主任是車頭，醫(yī)生是車廂，技術(shù)員就像輪子。技術(shù)是決定火車額定速度的動力，病理診斷就是司機，火車的好壞，動力的大小，最終要通過火車跑的怎么樣來表現(xiàn)出來。最終火車 開的好不好，還要靠所有部件的齊心協(xié)力才行。 5） 技術(shù)員的地位 常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技術(shù)工作沒前途。我想這有二方面的因素，第一，你的工作有沒做好。第二，隨著社會的發(fā)展，改革的深入，對知識 重視，醫(yī)生與技術(shù)員之間的差異會增大，我想這是正常的，我們不是整天叫中國要尊重知識嗎，不能因為對自己不利就不滿意了，我們只有服從這個社會，而不能叫社會服從我們 。人與人，工作與工作之間由于機遇不同，工作性質(zhì)不同，地位與待遇也就不同，沒必要比來比去。如果你不用心去做事，任何一個好工作對你來說都沒有好前途。只要你把本職 工作做好了，別人都會尊重你。在國外，有的國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4 - 5個多小時（凌晨4點多），也就是說在醫(yī)生到科前，你就要把昨天取材的組織做好，放在他 的桌上。我想遲早，中國也會走上這條路。我想每一人都應(yīng)該有這樣的觀念：工作不僅是一項事業(yè)，也是一種謀生的手段，敬業(yè)，是為了更好的保住自己的飯碗。那么，技術(shù)員的 地位就不可以提高了嗎？不是。提高地位靠什么，靠呼吁？同情？對抗？都沒有用。事物發(fā)展都有它內(nèi)在的規(guī)律，只有從根本上去解決決定技術(shù)員地位的東西。那就是提高技術(shù)的 知識含量，提高技術(shù)的完成質(zhì)量。 三、醫(yī)生與技術(shù)的關(guān)系： 1、很多人會說，技術(shù)員工作做的不好，和醫(yī)生沒什么關(guān)系，其實不然。最簡單的如取材，如果醫(yī)生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質(zhì)量都會有影響。技術(shù) 員片子做的不好，醫(yī)生可以退片，要求重切，這是我們技術(shù)員應(yīng)該做的；但是，如果醫(yī)生取材不好，技術(shù)員要退組織，大多數(shù)醫(yī)生是不會同意的。這里就存在一個不合理的現(xiàn)象。 還有的醫(yī)生提出取材不好，技術(shù)員可以自己去修一下，我不同意這樣的做法，一是技術(shù)員有可能修去你需要的病變，這個責任誰負，這是一種醫(yī)療事故，是對病人的不負責；二是 作為醫(yī)生你應(yīng)該做好你自己的本職工作。 2、醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度上影響著技術(shù)員，醫(yī)生不喜歡學(xué)習(xí)，技術(shù)員一般也不會學(xué)習(xí)。前面我說過新技術(shù)的應(yīng)用，會受到病理診斷水平和科研能力的制約。如果 醫(yī)生什么都不懂，什么工作都不開展，技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平也無法提高。我就碰到有的主任自己不會看特染，不懂免疫組化，卻說是技術(shù)員沒做好。真是比竇娥還冤，因為你連申辯 的地方都沒有，甚至有的還真以為自己就是這么差，在這樣的工作環(huán)境下，很多技術(shù)員會逐漸喪失了自信。 3、將就。很多醫(yī)生不管技術(shù)員切片做的多差，能將就的就將就，造就了技術(shù)員的惰性，我認為這是對病人的不負責，對技術(shù)員的不負責，也是對自己不負責。 4、看不起技術(shù)。這樣的病理醫(yī)生其實很多，認為技術(shù)員只是操作工，培養(yǎng)個2-3個月就可以做得很好（當然這很大程度也是我們技術(shù)員自己造成的，技術(shù)水平越差，醫(yī)生就越 看不起，你越看不起，我就越差，是一種惡性循環(huán)）。技術(shù)工作我認為有點象燒菜的，每個家庭都會燒。但是同樣的配方，同樣的油、鹽、醬、醋、味精，每人做出的味道就是不 一樣。做菜的也分將就型的、主婦型的、廚師型的、特級廚師型的。什么是廚師？廚師不僅對色、香、味、各種菜系、營養(yǎng)的搭配有研究，找出存在的問題和解決的方法，不斷地 吸收新的知識，還要有創(chuàng)新的能力。目前我們大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)了一點點皮毛，要學(xué)好技術(shù)，還有很長的一段路要走。重視技 術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少診斷的差錯，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。 2、其他原因： 1）有科研能力的與沒科研能力的病理科之間的差異 ２）大醫(yī)院與小醫(yī)院之間的差異 3）經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)與落后地區(qū)的差異 如何解決這些問題： 1、首先技術(shù)員要正確認識自己，擺正自己的位置，要自尊，自強，自愛！增強技術(shù)員的自信心，要相信自己能做到，能做的最好。 2、多學(xué)習(xí)理論知識，多向同行學(xué)習(xí)，學(xué)會總結(jié)經(jīng)驗，學(xué)會理論與實際相結(jié)合，學(xué)會用腦干活。 3、科學(xué)的管理和規(guī)范化操作，是解決質(zhì)量問題的關(guān)鍵。 病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗工作，由于經(jīng)驗的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量的不穩(wěn)定性。和國際接軌，是我們的奮斗目標，在這背景下，中華病理學(xué)會提出了病理技術(shù)規(guī)范化操作。病理技術(shù) 有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的前提下發(fā)明的，使用者往往自己不知道。每個地方操作方法不同，導(dǎo)致制片質(zhì)量各不相同。 規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理增加了病理制片質(zhì)量的穩(wěn)定性。 所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對使用試劑種類、pH值、濃度、溫度、時間以及操作的手法都有詳細的規(guī)定，盡可能的減少人為的影響，減少變量，減少影響制片質(zhì)量的條件。 特別是在做分子技術(shù)時，更應(yīng)嚴格按操作規(guī)則做。 所謂量化，就是把以前經(jīng)驗的東西用量來判定。比如說我們更換脫水試劑，一般都是要等組織不好切了才換，這樣總有幾天片子質(zhì)量不好；也有的是幾天到了就換，組織多時 脫水液的水份就多，后面幾天可能組織就脫不好；組織少了脫水液倒了很浪費，我們通過幾年的實驗，發(fā)現(xiàn)組織的量和試劑的更換時間有一定的規(guī)律，用量來控制脫水的更換時間 更具科學(xué)性。還有蘇木素、依紅也是如此。 要想搞好制片質(zhì)量，各地必須建立質(zhì)控組織，通過技術(shù)交流和行政監(jiān)督的手段，促進病理技術(shù)的發(fā)展，做好每一步。例如常規(guī)切片的注意事項： 1 . 取材 取材的好壞，直接影響切片的質(zhì)量。醫(yī)生在取材時，首先要有一把鋒利的取材刀，在切割組織時要避免取材刀來回拖拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般厚度以0.2 ～0.3cm為 適，較容易發(fā)脆的組織如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結(jié)、大塊癌組織等可適當厚一點，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些； 淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠，并盡量剔除周圍的脂肪組織。在取材中還應(yīng)十分注意組織內(nèi)是否有縫線或骨組織，如碰到不可避免的鈣化組織，應(yīng)與技術(shù)室講明，在切取纖維組織、肌肉 組織、胃腸道時，應(yīng)注意纖維及肌肉的走向，取材時盡可能按與纖維平行走向切取為佳。 2 . 固定 固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個制片過程中無法補救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位 置的過程。固定的目的是為了防止組織細胞自溶與腐敗，防止了細胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細胞內(nèi)的各和成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以 保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加組織韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的量 應(yīng)為組織的5倍。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關(guān)。最常用的固定液為10％福爾馬林。筆者認為，10％福爾馬林由于受到福 爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入的水分影響，濃度被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。通 過實踐，本人認為以酸性12～15％的福爾馬林最佳。大標本（2cm厚）一般需要6～12個小時，小標本一般需要3～6個小時；當室溫低18℃時，可在37℃以下的溫箱內(nèi)加溫4～6個小 時。由于HE染色最佳著色PH為3.5～4.5, 中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細胞核容易發(fā)灰,核染色質(zhì)不佳。 所以, 盡管中性福爾馬林對抗原有很好的保存作用，但酸性福爾馬林對絕大多數(shù)抗原來說也有很好的保存作用，所以在沒有特別處理的情況下常規(guī)HE用12～15％酸性福爾馬林也可 以（每100毫升12～15％福爾馬林液內(nèi)加5毫升冰醋酸）。骨髓、結(jié)締組織固定以Bouin液為佳，經(jīng)Bouin液固定后的組織必須流水沖洗4小時以上。有條件的單位可根據(jù)不同要求選用 二種或二種以上的固定液；少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫，以便適應(yīng)各種特殊的處理要求。 3. 水洗 固定后水洗（10～20分鐘），通常被很多人所忽視，而水洗不徹底，容易造成脫片和染色不鮮艷。對需做免疫組織化學(xué)的組織，更不應(yīng)當忽視。福爾馬林不利于組織塊內(nèi)抗原 的保存 4 . 脫水和透明 所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過度（原因是組織 在純酒精內(nèi)時間過久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過35℃）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等等。一般 我們總認為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實低濃度的酒精具有強大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒 精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時間就可完成，如果這時不縮短純酒精的時間，便會引起組織發(fā)脆；如果脫水時加溫，使用 丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標記。為了使石蠟浸入到組織塊內(nèi)，必須經(jīng)過一種既能與脫水劑混合，又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì)，這個過程稱透明。目前最好 的透明劑是二甲苯。很多人認為二甲苯極容易使組織發(fā)脆，這個觀點很片面，在常溫下，如果不是時間過長（超過２4小時以上）二甲苯并不會引起組織過份發(fā)脆，相反會使某些組 織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織：比如子宮肌瘤等相當好切），但是當二甲苯溫度超過35℃以后，極易引起組織發(fā)脆。所以本人認為，大小標本最好分開脫水，一般情況下，大標本脫水時 間（室溫18℃）以80％酒精2小時、95％酒精（2道）各1個半小時至2小時、純酒精（3道）各1個半小時至2小時，二甲苯（2道）各30-60分鐘為宜；小標本脫水時間應(yīng)相應(yīng)縮短。脫 水時間長短，與室溫高低有密切的相關(guān)。我們在實踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在12～15℃時，可作為一個臨界溫度范圍。當室溫高于此溫度范圍時，組織容易脫水，可適當縮短脫水時間；而 室溫低于該溫度范圍時，應(yīng)適當延長脫水時間（如能保證在一個恒定的溫度下最佳）。更換試劑，應(yīng)以量為基礎(chǔ)，定量更換，不能等到切片不好時再去更換。否則，至少會有2～3 批組織切片不好。根據(jù)我科經(jīng)驗，如試劑用量為500ml，每500個蠟塊更換一次為宜。 5. 浸蠟 組織透明后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。用其他浸透劑（如火棉膠、明膠等）滲入組織內(nèi)部的過程可稱為浸透或透入。浸蠟溫度過高（超過60℃），在蠟內(nèi)加入二 甲苯蠟或由于透明時帶進的二甲苯過多，都會導(dǎo)致組織發(fā)硬，還會使組織內(nèi)的抗原受到破壞；所以作者主張浸蠟用的石蠟熔點在56℃（三道），第一道：石蠟30分鐘；第二道：石 蠟90分鐘；第三道：石蠟，90分鐘。浸蠟溫度控制在56～58℃左右。（第一道也可用硬脂酸石蠟1：3混合浸蠟，不僅可軟化組織，特別適用于比較韌、硬的組織，而且由于硬脂酸 是弱酸性的，對細胞核有媒染作用，核漿比鮮明，但容易脫片；同時對疏松組織容易散片）。有條件的可以每天打開第一道石蠟的蓋子，讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟如有雜質(zhì) 盡可能過濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受損，或切片破碎和劃痕增多。 6. 包埋 用包埋劑來支持組織的過程稱包埋。最常用的是石蠟包埋法。包埋的關(guān)鍵一是平整，二是方位。要求在包埋時，應(yīng)采用鑷子輕壓組織塊拱起部份，使之平貼于底部，通常采用 組織的最大面包埋。囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。小塊多顆組織，應(yīng)盡量放在一起，并保證在一個平面上。修去兩邊的余蠟（所謂的兩邊，指切片時與切片刀垂直的兩側(cè)）。包埋 時還應(yīng)注意有無縫線，紙絮，如有一定要去除。胃黏膜活檢標本，不能按一般的規(guī)律取最大包埋面，應(yīng)采取窄面豎起包埋。包埋的蠟更應(yīng)過濾，留有雜質(zhì)的石蠟，容易造成污染或 刀口受損。蠟的熔點應(yīng)在56～58℃之間選擇，不提倡在冬天使用軟蠟。因為用軟蠟包埋的蠟塊，到了夏天，會粘在一起，不利于資料的保存，而且即使在冬天，用硬蠟包埋的蠟塊 也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。 7. 磨刀 要想切好一張切片，首先要有一把鋒利的切片刀。磨刀是從事切片技術(shù)人員的一項最基本技術(shù)，刀磨的好壞，直接關(guān)系到切片的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同，但都要求用力均 勻，使刀口和磨刀石全面接觸，兩手的用力點應(yīng)在刀口上，而不是在刀背上。切片刀應(yīng)用一次磨一次，每次僅需10～15分鐘，過長時間的磨刀，容易把已經(jīng)磨出的鋒刃磨掉，檢查 切片刀是否鋒利，用手試摸刀口的方法并不十分科學(xué)，不僅不能證明切片刀是否真正鋒利，而且容易損害刀口，最簡單的辦法是每次磨好后拿一個蠟塊試切一下。每次磨好刀后， 應(yīng)將磨刀石用蓋子蓋好，以防灰塵掉在磨刀石上，用有灰的磨刀石磨刀，會使切片刀產(chǎn)生許多細小的缺口。現(xiàn)在很多單位都買了磨刀機，磨刀機用來開刀鋒和磨缺口的確不錯，但 由于磨刀的角度和時間不易精確掌握，故效果并不理想。根據(jù)我們的經(jīng)驗，真正的鋒刃很難用機器磨出來。一次性刀片在很大程度上解決了這個問題。如用一次性刀片，必須及時 更換刀口。一個刀口切小標本不應(yīng)超過20～25只蠟塊，切大標本不應(yīng)超過10～15只蠟塊。 8. 切片 切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在５0～100微米左右，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進行細切。細切至組織塊表面均勻一致 ，無白點后，再把切的蠟片放入溫水中。切片時要求用力均勻、柔和，搖速不易過快或過慢。過快會導(dǎo)致切片厚薄不均，機器磨損；過慢會使切片增厚。切片厚度一般為3～5微米 。切片的要求是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應(yīng)與組織塊一致，切片的不完整，常會將重要病變遺漏，導(dǎo)致誤診、漏診。在切片放蠟塊時，應(yīng)注意組織包埋的方向，組 織的層次，纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行，較難切的部分應(yīng)放在上面，如皮膚的表皮，腫塊的包膜，胃腸道的漿膜等，這樣可以減少組織的斷裂現(xiàn)象。操作切片機時應(yīng)用力 均勻，避免用力過重。對脫鈣組織、骨髓，以及已知的鈣化組織，應(yīng)選用固定的刀口，以減少其他部位出現(xiàn)缺口的可能性。在使用毛筆展片時要防止筆絲進入刀口，因為每切到一 根筆絲，就會增加一個缺口。切片厚度一般為4～6微米，有人認為：只要切片機刻度標著幾個微米，切出來的片子就是幾個微米。其實不然，當切片刀不鋒利，或切片時速度不勻 ，或切的較慢時，切的片子都會變厚，只有在切片刀十分鋒利、切片勻速的情況下，才能真正保證其厚度。下面是切片時碰到的問題的原因及可能處理的方法：（1）組織發(fā)脆：一般 是脫水、透明、浸蠟時間過長、溫度過高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)，在切片時，邊切邊用嘴向蠟片吹氣，可能會好些。（2）切片卷起，可能是刀不鋒利，或刀鋒在另一面，或刀角 度過大，切片太厚等等。（3）蠟片彎曲：可能是刀鋒不均，切片刀未磨直，切片刀與蠟塊不平行。（4） 透明、浸蠟時間過長、溫度過高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)（5）厚薄不均：可 能是刀、刀座及蠟塊未夾緊，組織太硬，或切片機主軸太向前，或切片機已磨損。（6）切片出現(xiàn)裂痕：可能是刀有缺口，石蠟內(nèi)有雜質(zhì)，組織內(nèi)有鈣化、骨片或有線結(jié), 也可能會有 棉紙纖維等。（7）切片不連片，切不下片，切片很厚，或者切片后蠟塊發(fā)白，內(nèi)陷：組織脫水不佳。補救辦法：可先將蠟塊溶解，取出組織，放入加熱水浴的丙酮內(nèi)（80℃），30～ 60分鐘，再進行透明浸蠟包埋切片，也許會好一點。 9. 展片與撈片 展片水溫應(yīng)在42℃至47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點有關(guān),水溫過高，會引起組織細胞散開，水溫過低，切片皺摺無法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會造成石蠟溶解現(xiàn)象。 而用一次性刀片切的片子，一碰到熱水，片子上的皺摺就無法再展開，這有二個方法可以解決：第一、可以在切片時邊切邊向蠟片吹氣，這樣的片子就會非常平整，放到熱水里就 會自然展開，比較方便快捷，但這樣的片子會略微厚一點；第二、在切完片子后，先把切片放在30%酒精水溶液中，讓酒精的張力自動把皺摺展開，然后再將切片移到熱水，這樣的 片子會較薄;如酒精濃度過高，容易引起切片破碎，出現(xiàn)裂隙，像脂肪之類細胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會散開，故不能用此法。最后撈片時玻片要干凈，要選擇那些完整 、無皺摺的切片，粘貼于玻片中1/3和下1/3的中間。 10. 烤片和脫蠟 烤片，一般在60℃的溫箱內(nèi)烤片0.5～1小時左右，溫度過高，會引起切片細胞收縮；時間太短（少于20分鐘），容易造成脫片。脫蠟也相當重要，如果脫蠟不干凈，切片不易著 色或著色不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換，一般用3道二甲苯，每500ml液體，處理500張切片后更換一次為宜。當室溫低于18℃時，必須將切片從溫箱拿出后立即放入二甲 苯中脫蠟，或?qū)⒍妆椒湃霚叵鋬?nèi)預(yù)熱（37℃左右）脫蠟，最高不得超過60℃。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精洗去二甲苯，至水。 11. 染色 蘇木素染色時間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為5－15分鐘。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來水 藍化，并充分水洗（流水沖洗5分鐘以上），以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們不提倡使用堿性溶液（釋氨水、肥皂水等）促藍，盡管藍化效果很好，但從實踐的結(jié)果來看，用堿性 溶液促藍的切片不能長期保存，容易褪色。最后入伊紅復(fù)染（5－20秒）。HE染色的關(guān)鍵在于深淺適度，對比鮮明，一般有經(jīng)驗的，肉眼就能判斷，但偶而也會出現(xiàn)失誤，所以用顯 微鏡控制是最保險的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍化過程，在藍化結(jié)束后，應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞核著色是否合適，核結(jié)構(gòu)是否清晰，胞漿內(nèi)是否有殘留的蘇 木素等等。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是：細胞核與細胞漿應(yīng)藍紅相映，鮮艷美麗；核漿對比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見。 12. 脫水和封片 切片脫水應(yīng)從低濃度的酒精到高濃度的酒精，80%酒精1道，95%酒精2道，純酒精2道，（正丁醇1道），二甲苯2道。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅 退色，故脫水時間可短一點，每道3－5分鐘，純酒精每道10分鐘。為增加酒精與二甲苯的相融性，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；石碳酸－二甲苯液也有此效，但用石碳酸時如 不洗凈，可引起切片退色，不利于切片久存，故不作推薦。切片經(jīng)二甲苯透明后，用中性樹膠封固。為增加切片的透明度，防止細胞收縮、龜裂或切片出現(xiàn)黑色結(jié)晶樣小點。所以 我們規(guī)定切片必須濕封，不得用溫箱烤干或電吹風(fēng)吹干后干燥封片。在南方冬春、霉雨季節(jié)，封片時要防止口鼻呼出的氣體接觸到切片；在天氣較潮濕的日子里，不宜一次將多張 切片取出待封，以免切片“還潮”，形成透明不佳,出現(xiàn)云霧狀水珠。脫水劑的更換也應(yīng)有一定的時間規(guī)定。一般是每500ml液體，處理500張切片后更換一次為宜。封片樹膠不能過 稀，封片時樹膠要均勻充滿蓋玻片且樹膠不及外溢為佳。要將組織全部覆蓋，也不能有氣泡。最后，粘貼標簽，標簽必須貼于玻片左側(cè)，編號書寫清楚，最好能打印。 我希望在中華病理學(xué)會的倡導(dǎo)下，在各種組織的配合下，通過我們的努力，使中國的病理技術(shù)有一個質(zhì)的飛躍。 |
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