LONZA鱟試劑資料........詳情點擊網址

http://www.adsraven.com/a/gb2312/product/lonza/2010/0928/3762.html

 

        方法：通過對干擾鱟試驗準確性干擾因素的分析(包括鱟試劑本身、操作條件、配制原料等)，提出了鱟試驗中應注意的問題。結果：只要克服了檢查中的干擾因素，鱟法具有比家兔法更簡便、快速、靈敏度高、重現性好等優點。

　　結論：凡不干擾細菌內毒素檢查或雖有干擾但可克服的注射劑藥品，均可用鱟法代替家兔法檢查其熱原。

　　鱟試驗是利用鱟的變形細胞與微量內毒素產生凝集反應的現象，作為判斷供試品中細菌內毒素限量是否符合規定的一種方法［1］。它具有比家兔法更簡便、快速、靈敏度高、重現性好等優點。中國藥典1995年版已收載細菌內毒素檢查法(簡稱鱟試驗)，但只用于幾種輸液的檢查。根據現有的實驗證明，凡不干擾細菌內毒素檢查或雖有干擾，但可以克服的藥品注射劑，將能夠全部以鱟法代替家兔熱原檢查法。但是該法受到許多因素的影響，故在做鱟試驗檢查時，應注意下列問題。

　　1.1鱟試劑靈敏度ノ了保證檢查細菌內毒素結果的準確性，用于試驗的鱟試劑應首先核對靈敏度。因為在我們的實際工作中，發現鱟試劑均符合藥典規定標準前提下，由于生產廠家不同，部分鱟試劑的實測靈敏度與標示值有差異而導致檢測同一檢品時，用相同標示值的鱟試劑，出現不同結果。因而先核對靈敏度可避免因鱟試劑本身造成的判斷失誤。建議法定部門和生產單位應注意鱟試劑的質量檢查。

　　1.2供試品稀釋ピ諶⊙品時，一定要熟悉中國藥典的內容，不能直接取大輸液原液0.1ml進行檢查，這是排除干擾因素的簡單有效的方法。因藥典已明確規定試驗中鱟試劑的靈敏度不超過0.5EU/ml，根據供試品的稀釋公式：ス┦云廢∈捅妒=獿/λυL：供試品的內毒素限量(1EU/ml)λυ：鱟試劑靈敏度的標示值(EU/ml)故檢測大輸液均應稀釋后才能進行試驗，如選用更高靈敏度的鱟試劑，則應增加樣品的稀釋倍數。稀釋用的細菌內毒素檢查用水藥典作了規定。在4h內不得與鱟試劑產生凝集反應。

　　如果直接用供試品原液試驗，就會使供試品的內毒素提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml以下，這樣，根據目前大輸液的生產和貯藏條件，有些就會達不到，鱟法檢出的陽性率會提高，兔法復核的機遇也將增多，勢必會浪費人力物力。

　　2.1操作熟練程度ゲ僮魘毖細癜次蘧操作法進行，安瓿開啟前應先用砂石劃痕(不管是色點或包環易折安瓿)，用手半拉半掰將頸部折斷，防止碎玻屑掉入安瓿內及有一個比較整齊的頸口。在鱟試劑的溶解、樣品的稀釋及加入時，取樣均應準確量取。操作時，雙手避免在安瓿或試管的上方來回移動，加樣后迅速封閉管口，并立即放入恒溫水浴箱中，且整個操作過程中時間應緊湊，防止微生物的污染，否則易致假陽性的出現。

　　2.2混合液的pH值ス┦砸河膂資約粱旌弦旱膒H值對鱟試驗的影響較大，根據國內外資料的報道，試驗的最適pH為6.25～7.25才能形成最佳凝膠［2］。而藥典規定各種葡萄糖注射液的pH為3.2～5.5，我院控制在3.7～42之間。我們曾對pH值小于4.0的多批次葡萄糖注射液作了調pH和不調pH的比較試驗，結果發現在該pH范圍內兩者無顯著差異，不調pH者陰性抑制試驗仍可得到堅實的凝膠，說明不影響反應靈敏度，且鱟試劑本身具有一定的緩沖能力。但pH值過大或過小均可抑制鱟試劑與細菌內毒素的反應，其原因可能是pH值過大或過小均可破壞極微量的內毒素。

　　2.3保溫溫度ソ細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水稀釋成1EU/ml，進行鱟試驗，然后分別放置于25、28、31、34、37、40、43、46、49℃水浴保溫。實驗中觀察到凝膠形成的速度隨著溫度的升高而加快，但到達49℃保溫90min也未出現凝膠。

　　從實驗可以看出，溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在25～40℃之間，隨著溫度的升高，鱟試劑的靈敏度亦增大，在40～46℃之間，溫度對鱟試劑的靈敏度無明顯影響，達到49℃或更高溫度時，則會破壞鱟試劑。故應嚴格按照藥典的要求，溫度控制在(37±1)℃之間，才可獲得理想的結果。

　　2.4保溫時間ソ細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水稀釋成1EU/ml，進行鱟試驗，37℃水浴保溫，分別在10、20、30、40、50、70min時觀察，發現凝膠形成的堅實狀態隨著時間的延長而堅固。

　　從上述實驗可以看出，延長保溫時間，可以提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽性。故應遵守我國藥典規定的保溫(60±2)min時間。

　　2.5在鱟試驗過程中應防止試管受到振動ヶ資約劣胂婦內毒素形成的凝膠受到振動后易變形而誤判為陰性。因此，在鱟試驗過程中，不宜進行容易引起試管振動的實驗操作，試驗用的試管架的眼孔直徑應與安瓿或試管直徑相接近，避免安瓿或試管左右晃動。水浴箱要放置在固定不易受到振動的地方，保溫過程中不可隨時取出觀察。

　　3.1配制的原料ピ邛資匝榧觳庵校0.9%氯化鈉注射液多次出現假陽性反應，對此進行了實驗工作，查找原因，發現陽性率高與廠家原料有關。ケ收甙巡煌廠家生產的氯化鈉原料配制的0.9%氯化鈉注射液，對不能通過鱟法檢查的送藥檢所用兔法檢查，結果為陰性，其中個別廠家的陽性率高于其它廠家，為此將不同廠家的氯化的原料分別在230℃烘焙1h后進行比較，發現個別產品色澤明顯變黃。按中國藥典1995年版附錄規定的易炭化物檢查，分別將不同廠家的氯化鈉原料進行易炭化物相對照檢查，結果上述明顯變黃廠家的氯化鈉色澤較深。因此認為個別廠家的注射用氯化鈉原料含有較多的有機雜質，希望廠家要控制好質量。チ磽猓在葡萄糖原料中偶有存在著β-D聚葡糖的現象，它與鱟試劑發生凝集反應，但注入兔體內不能使其升溫，故造成假陽性，所以最好是使用定點廠家合格的葡萄糖原料。

　　3.2所用器皿均應徹底洗凈和滅菌安全ナ笛橛悶髏缶應充分洗滌并沖洗干凈，特別是接觸酸堿或用洗衣粉、洗液等洗滌后，更應沖洗干凈，以免殘留物破壞極微量的內毒素。滅菌應按藥典中的有關方法處理，防止引入外源性內毒素。如有條件的話可用合格的細菌內毒素快檢盒。